基因工程的基本操作程序第步.pptVIP

第1页，共17页，星期日，2025年，2月5日复习提问1.基因工程的基本操作程序的四个步骤2.目的基因主要指什么?也可以是什么?3.获得目的基因常用的方法。4.基因文库主要包括哪两种?5.PCR技术的原理、条件6.PCR与DNA复制的区别（表格）第2页，共17页，星期日，2025年，2月5日PCR技术—聚合酶链式反应

原理：条件：PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的两条链为模板温度控制第3页，共17页，星期日，2025年，2月5日PCR技术与DNA复制的比较DNA复制PCR技术解旋酶催化DNA在高温作用下变性解旋细胞内（主要在细胞核内）细胞外（主要在PCR扩增仪内）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐热的DNA聚合酶（Taq酶）细胞内温和条件需控制温度，在较高温度下进行区别解旋方式场所酶温度条件前提有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物联系①模板：均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成②原料：均为四种脱氧核苷酸第4页，共17页，星期日，2025年，2月5日PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成_______b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链第5页，共17页，星期日，2025年，2月5日1.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。2.用_____________切断目的基因，使其产生_________________。——核心3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶的黏性末端切口DNA连接酶相同(二)基因表达载体的构建第6页，共17页，星期日，2025年，2月5日基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。第7页，共17页，星期日，2025年，2月5日科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。资料:第8页，共17页，星期日，2025年，2月5日基因表达载体的组成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因等第9页，共17页，星期日，2025年，2月5日(三)将目的基因导入受体细胞借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化——目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达第10页，共17页，星期日，2025年，2月5日方法导入植物细胞导入动物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——Ca离子处理法(三)将目的基因导入受体细胞第11页，共17页，星期日，2025年，2月5日目的基因插入Ti质粒的T-DNA上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞的染色体上目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染色体上2.转化第12页，共17页，星期日，2025年，2月5日