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人用单克隆抗体质量控制技术指导原则

本要点合用于供治疗的体内诊断用的运用杂交技术制冬的单克隆抗体，合用于在人体内应

用的运用反复DNA技术制备的基因工程抗体

一、杂交技术制备的单克隆抗体

（一）杂交细胞

1.亲本细胞

（1）骨髓细胞

SP2/0或其他合适的骨髓细胞系。应为不合成或不分泌免疫球蛋白链型，具有符合骨髓

细胞的染色体特性，并有明确的来源历史及符合规定的保留条件。

2（）免疫亲代细胞

经抗原免疫的鼠脾B淋巴细胞或外周血B淋巴细胞。

应有明确的免疫本来源、性质及动物种系，免疫原详细的制备过程。

合适的免疫方案及免疫淋巳细胞制备的措施。

2.细胞融合与克隆化

采用合适H勺措施进行融合、筛选及克隆化。

3.杂交细胞检定

（1）抗体分泌稳定性

持续克隆化后抗体阳性率达100%,经体外持续传代3个月以上和反复冻存、复苏，细胞

系能保持稳定分泌特异性抗体。

2（）细胞核学特性

检查细胞分裂中期染色体，应符合杂交细胞特性。

4.鼠源病毒检查

按附录规定检测鼠源病毒。

5.支原体检查

按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。

6.无菌试验

按现行《中国药典》生物制品无菌试验规程进行。

（二）单克隆抗体的检定

1.免疫球蛋白类及亚类

用免疫双扩散法或其他合适口勺措施测定。

2.亲和力

用可靠、精确的措施测定单克隆抗体（如下简称为单抗）的亲和常数或相对亲和力,一

般状况下，对于免疫原为可溶性的单抗，测其亲和常数，对于免疫原为颗粒性抗原的单抗,

测其相对亲和力。

3.特异性

测定单抗对靶抗原的特异性；对多株单抗识别II勺抗原决定簇进行有关性分析。

4.交叉反应

按附录规定。

免疫组织化学法测定单抗与人体组织交叉反应，用冰冻及石蜡包埋的多种正常脏器沮织

测定。来源于肿有关抗原的单抗应进行与多种肿组织的交叉反应试验。

5.效价测定

用合适措施测定。

（三）其他原材料

1.细胞培养用小牛血清

支原体检测应为阴性。经小量试验适于杂交细胞生长。

2.培养液

应有培养液来源，质量指标。

3.化学试剂

规格应到达分析纯以上。

二、基因工程抗体

参照《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和本指导原则中的有关规定进行。

三、细胞库的建立

应分别建立原始细胞库、主细胞库、工作细胞库的三级管理细胞库，一般状况下主细胞库来

日原始细胞库、工作细胞库来自主细胞库。各级细胞库应有详细的制备过程、检定状况及管

理规定等V

四、单抗生产

包括用小腹水法和细胞培养法制备。

（-）小腹水法

1.小

制备腹水必需使用合格的SPF级BACB/C小或BACB/C和瑞士小杂交子一代。

2.动物试验设施

动物试验设施应有有关部门颁发的二级以上合格证。

3.腹水制备

取适量扩增培养的杂交瘤细胞注射小腹腔制备腹水，小可以预先用液体石蜡或降植

烷等处理。

（二）细胞培养法

可以采用发酹罐培养，亦可用细胞培养瓶培养搜集上清液制备单克隆抗体。培养基用无

牛血清或低牛血清培养基，不能用-内酰胺类抗生素。

H（）抗体纯化

可采用盐析法、分子筛层析、离子互换亲和层析等合适的措施。

1.尽量选用某些不引起免疫球蛋白聚合、变性等的纯化措施及条件。

2.应验证所用的纯化措施能清除也许存在的非FW勺产物污染，如不需要的免疫球蛋白分

子、宿主DNA、用于生产腹水抗体U