纯培养与显微技术.pptVIP

第二章纯培养与(Yu)显微技术;微生物的分离和纯培养

1.无菌技术

2.用固(Gu)体培养基分离纯培养

3.用液体培养基分离纯培养

4.单细胞（孢子）分离

5.选择培养分离

6.二元培养物

显微镜和显微技术

1.显微镜的种类及原理

2.显微观察样品的制备;微生物个(Ge)体：小;培(Pei)养物;显微技术(Shu)是微生物研究的另一项重要技术(Shu);一、微生物的分离和纯(Chun)培养;试管、烧瓶、培养皿(Min)等常用器皿(Min)

灭菌方法有：高压蒸汽灭菌、高温干热、煮沸;接种针或接种环分离或将微生物从一个培养器皿转

接到另一个，无菌操作。火焰旁边、超净台或无菌室

进行。

接种环采用迅速加热和冷却的镍铬合金制(Zhi)备

液体培养物用无菌移液管或移液器;一、微生物的分离(Li)和纯培养;用固(Gu)体培养基分离纯培养

;一(Yi)、微生物的分离和纯培养;一、微生(Sheng)物的分离和纯培养;同一细菌在不同的(De)培养平板上形成不同的(De)特征菌落;克隆（clone)：一个单细胞繁殖形成的菌落，即一个纯种细胞群或克隆。

固体培养基：琼脂或其他凝胶物质固化的培养基。

平板：即培养平板（cultureplate)。融化的固体

培养基倒入(Ru)无菌平皿冷却凝固后即为平板，

用于分离、培养微生物。

;稀释平板法（pourplatemethod)

将细菌或其他微生物无菌水梯度稀释，取少量与冷却至50℃固体培养基混合(He)，摇匀，倒入培养皿，凝固，倒置培养24小时，就会出现菌落。

;一、微生物的分离和纯(Chun)培养;涂布平板法(Fa)（spreadplatemethod)

稀释平板法因为细菌与50℃培养基混合导致某些热敏感菌死亡，及好氧菌埋在培养基中缺乏氧气影响生长，所以更常用涂布平板法。;一、微生(Sheng)物的分离和纯培养;平板划线分离法（streakplatemethod）

接种环沾取少许微生物，在无菌(Jun)平板扇形、平行等划线，随划线次数增加而分散开，得到单菌(Jun)落。

;第二十页，共六十一页。;稀释摇管法(dilutionshakeculturemethod）

厌氧微生物可用此法进行纯培养分离。

操作：盛培养基试管加热融化，冷却至50℃，待分离材料用这些试管梯度稀释，摇匀，冷凝，石蜡封(Feng)口;厌氧微生物分离(Li)装置：;液??培养(Yang)基分离纯培养(Yang)：;显微分(Fen)离法直接分(Fen)离单细胞或单个个体培养获得纯培养;对某微生物生长需要了解后，设计适合其生长繁殖的培

养基，抑制其他菌(Jun)生长，即使该微生物在混杂群体中很

少也可分离。

;选择培养基直接(Jie)分离

;一、微生物的分(Fen)离和纯培养;根据微生物的特殊(Shu)要求，从自然界分离出特定已知微生物种类;一(Yi)、微生物的分离和纯培养;一、微生物的分离和纯培(Pei)养;一、微生物的分离和(He)纯培养;斜面：可保存数周至数年，可用石蜡或橡皮塞封口，低

温延长保存时间

液体：菌苔制成菌悬液，低温（悬液保藏法）

缺点：繁琐、易(Yi)污染、变异丧生原有特性;一、微生物的分离(Li)和纯培养;一(Yi)、微生物的分离和纯培养;二、显微(Wei)镜和显微(Wei)技术;二、显微镜和显微技(Ji)术;二、显微(Wei)镜和显微(Wei)技术;二、显(Xian)微镜和显(Xian)微技术;N：玻片与(Yu)物镜间介质的折射率;二、显微镜和(He)显微技术;二、显微(Wei)镜和显微(Wei)技术;暗视野显(Xian)微镜;暗视野显微(Wei)镜;相差显(Xian)微镜;相(Xiang)差显微镜;荧光显微(Wei)镜;二、显微镜(Jing)和显微技术;二、显微镜(Jing)和显微技术;大肠杆菌

透射(She)电子显微镜图;扫描(Miao)电子显微镜（SEM）;扫(Sao)描隧道显微镜（STM）;厨房抹布上的(De)细菌和霉菌;显(Xian)微样品制备;二、显微镜和(He)显微技术;二、显微镜和显微技(Ji)术;活体观察难看到微生物的细致形态和结构，需染色观察。

染色前需要对样品固定(Ding)，目的：杀死细菌使菌体黏附在

玻片上；还可增加对染料的亲和力。

常用：酒精火焰加热和化学固定两种方法

;二(Er)、显微镜和显微技术;二、显(Xian)微镜和显(Xian)微技术;透(Tou)射电镜制样

;投影技术：

真空蒸发设备将铂或铬等对电子散射能力强的金属原子，由样品斜上(Shang)方喷镀，提高样品反差。可用于病毒、细菌鞭毛、离体细胞器、蛋