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氧化胁迫下拟南芥卡尔文循环关键酶SBPase羰基化修饰与功能关联探究

一、引言

1.1研究背景

1.1.1氧化胁迫对植物的影响

氧化胁迫是指在逆境条件下，植物体内产生的过量活性氧（ReactiveOxygenSpecies，ROS）类物质对植物的生长、发育和繁殖产生的环境压力。这些ROS包括过氧化氢（H_2O_2）、超氧根阴离子（O_2^-）、氢氧根离子（OH^-）、羟自由基（·OH）等。正常情况下，植物细胞内的ROS处于动态平衡状态，它们在植物的生长发育、信号传导等过程中发挥着重要作用。然而，当植物长时间受到如高温、低温、干旱、盐碱、强光、有害气体（如臭氧、二氧化硫）、紫外线辐射、病原侵染等逆境胁迫时，细胞内ROS的产生速率会大幅增加，超出植物自身对ROS的清除能力，从而导致氧化胁迫的发生。

氧化胁迫会对植物的多个生理过程产生负面影响。在生长发育方面，它会抑制植物细胞的分裂和伸长，导致植株矮小、叶片发黄、枯萎等症状。在光合作用过程中，ROS会攻击光合机构的关键组分，如光合色素、光合膜和光合酶等。过氧化氢可以抑制碳固定，超氧化物会使一些含金属的酶类失活，进而影响光合作用的电子传递和碳同化过程，导致光合速率下降。此外，ROS还会攻击蛋白质的氨基酸残基，造成二硫键的形成和蛋白质的断裂，导致DNA、蛋白质、膜脂和其他细胞组分的损伤，严重影响植物的正常生理功能。

尽管氧化胁迫对植物造成诸多危害，但植物也进化出了一套复杂的防御机制来应对氧化胁迫。植物体内有效清除ROS的机制分为酶促和非酶促两类系统。酶促系统包括超氧化物歧化酶（SOD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等。SOD可清除细胞中多余的超氧根阴离子；APX是清除过氧化氢的主要酶类，提高APX的活性可以增强植物抗氧化胁迫能力。非酶促系统ROS清除剂包括抗坏血酸、谷胱甘肽、类黄酮、α-生育酚、胡萝卜素等。这些物质既可直接与ROS反应将其还原，又可作为酶的底物在ROS的清除中发挥作用。然而，当氧化胁迫过于严重时，植物自身的防御机制可能无法完全抵御ROS的伤害，从而对植物的生长和生存造成威胁。

1.1.2卡尔文循环及SBPase在其中的作用

卡尔文循环又称光合碳循环、卡尔文-本森-巴斯厄姆（CBB）循环、还原磷酸戊糖循环或C3循环，是光合作用的暗反应的一部分，反应场所为叶绿体内的基质。该循环由美国化学家梅尔文?卡尔文经过长期研究揭示，为此他获得了1961年诺贝尔化学奖。

卡尔文循环可分为三个阶段：羧化、还原和二磷酸核酮糖（RuBP）的再生。在羧化阶段，一分子二氧化碳在二磷酸核酮糖羧化酶（Rubisco）的作用下，整合到一个五碳糖分子1，5-二磷酸核酮糖（RuBP）的第二位碳原子上，形成一种极不稳定的六碳化合物，该化合物会立刻分解为两分子的三碳化合物3-磷酸甘油酸。这一步反应的意义是把原本并不活泼的二氧化碳分子活化，使之随后能被还原。在还原阶段，3-磷酸甘油酸被在光反应中生成的NADPH+H还原，此过程需要消耗ATP，产物是3-磷酸丙糖。在RuBP再生阶段，经过一系列复杂的生化反应，一个碳原子将会被用于合成葡萄糖而离开循环，剩下的五个碳原子经一些列变化，最后再生成一个1，5-二磷酸核酮糖，循环重新开始。循环运行六次，生成一分子的葡萄糖。卡尔文循环是光合碳固定的起始反应步骤，在C3植物中，它是由存在于叶绿体内的11种酶催化的13个反应步骤完成，对维持植物的生长和生存具有至关重要的意义。

景天庚酮糖-1，7-二磷酸酶（SBPase）在卡尔文循环中扮演着关键角色，它对RuBP的再生起着重要作用。在卡尔文循环中，SBPase催化景天庚酮糖-1，7-二磷酸（SBP）水解生成景天庚酮糖-7-磷酸（S7P），S7P进一步参与后续反应，最终实现RuBP的再生。RuBP作为二氧化碳固定的受体，其再生能力直接影响着卡尔文循环的运转效率。如果SBPase的活性受到抑制或降低，RuBP的再生能力将会下降，进而造成光合速率下降。大量研究表明，SBPase在决定碳向终产物分配的过程中处于重要战略位置。例如，有研究利用在叶绿体内高表达SBPase的转基因烟草来确定其对光合速率和源库器官碳分配的贡献，结果证实SBPase增加为原来1.6倍的转基因植物对RuBP的再生产生积极的影响，增加了RuBP水平，并且增加了Rubisco的起始活化能力，进而增加了光合速率。前人报道过表达拟南芥SBPase的转基因烟草和野生型的相比，SBPase活性增加了10%-65%，幼嫩的伸展叶的光合