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荧光光度分析法与药物分析

化材院化工3班姚依弟前言

当紫外光照射到某些物质的时候，这些物质会发射出各种颜色和不同强度的光，而当紫外光停止照射时，这种光线也随之很快地消失，这种光线称为荧光。利用这种能够反映物质特性的荧光对该物质进行定性和定量分析的方法称为荧光分析法。

荧光是分子从激发态的最低振动能级回到它原来的基态时发射的光，激发的完成是由于光的吸收。吸收与荧光密切相关，因为吸收必须先于荧光发射。由于碰撞和热的耗散常使一部分吸收能丧失，剩余荧光的能量比吸收的能量小，因此荧光在更长的波长发射。

【一】荧光分光光度法的分析方法

荧光分析的灵敏度一般都高过应用最广泛的比色法和分光光度法。比色法及分光光度法的灵敏度通常在千万分之几；而荧光分析法的灵敏度常达亿分之几，甚至有千亿分之几的。荧光分析法的另一优点是选择性高。荧光分析法还有方法快捷，重现性好，取样容易，试样需要少等优点。荧光分析法也有它的不足之处，主要是指它比起其它方法来说应用范围还不够广泛，因为有许多物质本身不会产生荧光。

为使荧光分析法的应用更加广泛，发展了各类荧光分析方法，如对不发荧光的物质可通过某类化学反应使其转变为适合测定的荧光物质，对荧光较弱的物质可采取荧光增敏分析法。荧光分析法可分为直接荧光测定法和间接荧光测定法。直接测定法是利用物质自身发射的荧光进行定量测定。但是自身发荧光的药物寥寥无几，所以一般采用间接法测定。

1、直接荧光分析法

直接荧光分析法适用于自身能产生荧光的药物。因荧光性质与溶液的EF值有关，故荧光强度的测定需在适宜的EF缓冲溶液中进行。对于成分复杂的生物供试品，为了防止干扰，有时需利用萃取、沉淀、色谱分离等方法除去干扰物，以降低荧光空白本底，提高分析灵敏度。已用于直接荧光分析法的药物有盐酸洛哌丁胺、双水杨酯、左旋溶肉瘤素、叶酸等。

本身能发荧光的物质,可用荧光分光光度法直接测定。鲍霞认为可用荧光分光光度法直接测定氧氟沙星胶囊的含量。取氧氟沙星胶囊药粉用醋酸-醋酸钠缓冲溶液配溶液,2h后,室温,用试剂作空白,在RF-5301型荧光分光光度(日本岛津)上,以427nm为激发长,500nm为发射波长测定荧光强度,计算其标示量的百分含量。本法操作简单,快捷,灵敏度高,结果满意。

2、间接荧光分析法

本身荧光很弱的物质,常采用氧化还原反应、配位反应等化学反应将其变为能发荧光的物质,用荧光分光光度法间接测定。

利用导数荧光光谱法进行物质测定的方法称为导数荧光分析。导数荧光分析可以提高光谱精细结构的分辨能力，减小光谱干扰。所以，导数荧光分析的抗干扰能力强，应用于多组分混合物分析可不经分离而直接进行荧光测定。该方法已用于维生素B、氧氟沙星对映体、环丙沙星等药物的定量测定。

（2）同步荧光分析法

当一些化合物的激发波长和发射波长存在比较大的差距时，应用同步荧光技术能有效降低散射峰的干扰。同时，对激发和发射光谱同步扫描，对描出的图谱进行微分处理，使重叠的峰彼此分离，可得到较可靠的测量结果。同步荧光分析法与导数荧光分析法联用能取得较高的灵敏度，如用同步--导数荧光光谱法测定尿样中的痕量左氧氟沙星和洛美沙星，检出限分别可达0.3,0.35mg/L。

【二】荧光光度分析法在药物分析中的应用

荧光分析法在药物分析中主要用于微量或痕量物质的定性和定量测定,尤其是中药有效成分的检测,在这个领域上的探讨也越来越多,近几年也有报道用于测定脂质体的包封率。但是荧光分析的干扰因素较多,测定时对环境因素敏感,对实验条件要求严格,因此荧光分析法在药物分析中的应用不够广泛,远少于紫外--可见分光光度法。因为中药的化学成分复杂,有效成分难以确定,仅单方制剂亦为一多种成分的混合物,因此要求更严格和更先进的分离、分析手段进行鉴别和含量测定。而荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、试样量少和方法简便等优点,故荧光分光光度法在中医药上的应用越来越多。

有关药物的分析，药典所规定的标准方法大多采用紫外一可见分光光度法。对于成药（如片剂、针剂和口服液）中药物含量的分析，由于含量大，采用紫外一可见分光光度法分析，不失为一种方便、准确的方法。但对于诸如血清、尿液、组织提取液等生物样品中药物及药物代谢产物的分析，由于其含量低，紫外--可见分光光度法往往达不到所需的灵敏度。荧光分析法与之相比，灵敏度具有显著的优势，为这类物质提供了新的灵敏的分析手段。

荧光分析在药物中的应用可追溯至19世纪60年代，常规荧光分析法最早被应用于分析抗疟疾药物奎宁。随着荧光分析法的发展，其应用范围日益扩大，被广泛用于抗菌素药物、止痛药、镇静剂、止血药等的分析，涉及合成药物、生物药物和天然药物。由于自身具有发射荧光特性的物质相对较少，并且受到拉曼峰和散射光等背景的干扰，常规荧光分析法在药物分析中的应