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细胞抗原的制备课件

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目录

壹

细胞抗原概述

贰

细胞抗原的来源

叁

细胞抗原的制备流程

肆

细胞抗原的检测与分析

伍

细胞抗原制备的实验技巧

陆

细胞抗原制备的应用领域

细胞抗原概述

第一章

定义与分类

细胞抗原是能够被免疫系统识别并引发免疫反应的细胞成分或产物。

细胞抗原的定义

细胞抗原按来源可分为自体抗原、异体抗原和肿瘤抗原等。

根据来源分类

细胞抗原根据其在免疫反应中的作用，可分为免疫原性和免疫调节性抗原。

根据功能分类

抗原的生物学功能

抗原通过与免疫细胞表面的受体结合，触发B细胞和T细胞的活化，启动特异性免疫应答。

启动免疫应答

抗原呈递细胞将抗原片段展示给T细胞受体，激活细胞毒性T细胞，消灭被感染或异常的细胞。

激活细胞毒性T细胞

特定抗原的识别导致B细胞分化为浆细胞，产生针对该抗原的特异性抗体，中和或标记抗原。

促进抗体产生

抗原在免疫中的作用

启动免疫应答

抗原被免疫细胞识别后，触发B细胞和T细胞的活化，启动特异性免疫应答。

区分自我与非我

抗体的产生

抗原刺激B细胞产生特异性抗体，中和或标记抗原，促进其被清除。

免疫系统通过抗原识别机制区分自身组织与外来病原体，避免自身免疫反应。

记忆细胞的形成

初次接触抗原后，免疫系统形成记忆细胞，为快速响应再次感染提供基础。

细胞抗原的来源

第二章

细胞来源的种类

动物细胞通常来源于实验室培养的动物组织或细胞系，如小鼠、大鼠或人类细胞。

动物细胞来源

微生物细胞包括细菌、酵母和真菌等，它们可以从自然环境或特定培养基中获得。

微生物细胞来源

植物细胞可从植物组织中提取，例如从叶片、根或果实中分离细胞。

植物细胞来源

细胞培养技术

从组织中分离细胞，进行初次培养，用于获取新鲜的细胞抗原，如皮肤或内脏组织。

原代细胞培养

利用单细胞培养技术，形成细胞克隆，以确保细胞抗原的均一性和纯度。

细胞克隆技术

通过选择性培养，使特定细胞类型增殖形成细胞系，用于大规模生产细胞抗原。

细胞系的建立

01

02

03

细胞裂解方法

使用匀浆器、超声波破碎仪等物理手段破坏细胞膜，释放细胞内成分。

机械裂解法

通过细菌或病毒等生物因素感染细胞，促使细胞裂解，获取抗原。

生物裂解法

利用去污剂、酶或有机溶剂等化学物质溶解细胞膜，提取细胞内抗原。

化学裂解法

细胞抗原的制备流程

第三章

制备前的准备工作

根据实验目的选择特定的细胞系，如肿瘤细胞系或正常细胞系，以确保抗原的特异性。

选择合适的细胞系

优化细胞培养的条件，包括温度、CO2浓度、培养基成分等，以保证细胞生长状态良好。

细胞培养条件优化

通过显微镜计数或细胞计数仪评估细胞数量，确保有足够的细胞用于后续的抗原制备过程。

细胞数量的评估

抗原提取步骤

使用物理或化学方法破坏细胞膜，释放细胞内含物，为提取抗原做准备。

细胞裂解

通过层析、离心等技术去除杂质，获得高纯度的抗原蛋白。

抗原纯化

利用ELISA、WesternBlot等方法检测提取的抗原，确保其活性和纯度符合实验要求。

抗原检测

抗原纯化技术

利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过层析柱分离纯化目标抗原，提高纯度。

亲和层析技术

01

通过抗原表面电荷与离子交换树脂的相互作用，实现抗原的分离和纯化。

离子交换层析

02

根据分子大小差异，通过凝胶介质过滤，分离不同大小的抗原分子。

凝胶过滤层析

03

利用高速旋转产生的强大离心力，将抗原与其他细胞成分分离，达到纯化目的。

超速离心法

04

细胞抗原的检测与分析

第四章

常用检测方法

01

酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA通过酶标记抗体检测抗原，广泛应用于临床诊断和科研中，如HIV抗体检测。

02

流式细胞术（FlowCytometry）

流式细胞术利用荧光标记抗体，对细胞表面或内部抗原进行定量分析，常用于免疫分型。

03

免疫印迹法（WesternBlot）

WesternBlot通过电泳分离蛋白质，然后转膜并用特异性抗体检测，用于验证特定蛋白表达。

04

免疫荧光技术（Immunofluorescence）

免疫荧光技术利用荧光标记抗体直接在细胞或组织切片上定位抗原，用于细胞内抗原的检测。

分析技术的应用

流式细胞术用于细胞表面和内部抗原的快速定量分析，广泛应用于免疫学研究。

流式细胞术的应用

免疫组化技术通过抗原-抗体反应定位细胞内特定抗原，用于病理诊断和研究。

免疫组化技术

质谱技术能够精确测定抗原分子的质量和结构，用于复杂样本中抗原的鉴定和定量。

质谱技术在抗原分析中的应用

结果的解读与评估

通过Westernblot等技术验证抗原与抗体的特异性结合，确保实验结果的准确性。

01

确定抗原特异性

利用ELISA或流式细胞术定量分析抗原表达量，评估其在细胞中的表达水平。

02

评估