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布鲁氏菌外膜蛋白Omp15原核表达与免疫活性鉴定的研究

一、引言

1.1布鲁氏菌病概述

布鲁氏菌病（Brucellosis）是一种极具危害性的人畜共患传染病，其病原体为布鲁氏菌（Brucella），这是一类革兰氏阴性短小杆菌，无芽胞、无鞭毛，光滑型菌株有微荚膜。该病菌传染性强，能够通过体表皮肤黏膜、消化道、呼吸道等多种途径侵入机体，人的感染途径与职业、饮食、生活习惯密切相关，含有布鲁氏菌的各种污染物及食物，如病畜流产物、病畜的乳、肉、内脏以及被污染的皮毛、水、土壤、尘埃等均可成为传播媒介。

布鲁氏菌病在全球范围内广泛流行，世界动物卫生组织（OIE）将其列为B类法定传染病，《中华人民共和国传染病防治法》将其列为乙类传染病。据统计，在世界200多个国家和地区中，有160多个国家和地区存在布鲁氏菌病的流行，约占世界1/5-1/6的人受到该病的威胁，全世界布鲁氏菌病患者约有500-600万人，每年新发病人数达50万，每年因该病造成的经济损失高达数十亿美元。我国早在1905年就首次报告了两例布鲁氏菌病患者，上世纪50-60年代，布鲁氏菌病在我国人畜中流行较为严重，虽在20世纪80年代到90年代初疫情曾得到基本控制，但自1993年起疫情出现反弹，1996年部分省区疫情明显回升，近年来，我国畜间布病呈现高位流行态势，主要流行于华北、西北和东北地区，且有向南方省份扩散的趋势，从监测结果来看，北方地区牛羊场布病流行率仍在高位运行，羊场群体和个体阳性率有上升趋势，南方地区部分牛羊场也有阳性检出，牛羊群中流行的布病菌株种型以牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌为主，在牛羊混合饲养的地区，还存在布鲁氏菌跨畜种混合感染的情况。

布鲁氏菌病给畜牧业和人类健康带来了沉重打击。在家畜中，牛、羊、猪最为易感，感染后会导致生殖器官和胎膜发炎，引发流产、不育和各种组织的局部病灶，使牛羊养殖场生产性能大幅降低，如家畜的繁殖率下降、肌肉萎缩、产奶量减少等，严重影响了畜牧业的经济效益，养殖户不仅面临养殖收益减少的困境，还可能需要承担重建养殖设施的巨大成本。对人类而言，感染布鲁氏菌后，疾病在临床上可分为急性感染和慢性感染，急性感染主要症状包括发热、多汗、乏力、肌肉和关节疼痛、睾丸肿痛等，慢性感染可由急性期发展而来，也可无急性期病史而直接表现为慢性，严重影响患者的生活质量和身体健康，给家庭和社会带来沉重的医疗负担。此外，布鲁氏菌病还对食品加工和农产品贸易造成了严重威胁，由于布鲁氏菌会在乳制品、肉类等食品中传播，引发食品安全风险，一旦发生感染，相关国家和地区的食品贸易可能会受到限制，消费者信心也会受到打击，导致市场需求下降，进一步阻碍经济发展。

1.2布鲁氏菌外膜蛋白研究背景

布鲁氏菌具有特殊的细胞膜结构，主要由脂多糖、外膜蛋白和脂质蛋白等组成，其中外膜蛋白（OuterMembraneProteins，OMPs）位于细菌细胞膜的最外层。外膜蛋白对于维持膜的完整性和选择性渗透起着至关重要的作用，同时也是布鲁氏菌重要的毒力因子，在布鲁氏菌感染致病过程中扮演着关键角色。在布鲁氏菌的感染过程中，其外膜蛋白首先与宿主细胞接触，在黏附、入侵细胞时发挥着不可或缺的作用。

国际上对布鲁氏菌OMPs目前仍采用1980年代的分类方法，即第1组（94kDa或89kDa）、第2组（38kDa-36kDa）和第3组（31kDa-25kDa）。布鲁氏菌的OMPs具有良好的免疫原性，能够刺激机体产生较强的免疫力，可作为布鲁氏菌病诊断性抗原和布鲁氏菌亚单位疫苗的候选物。众多研究表明，布鲁氏菌外膜蛋白能引发机体的免疫反应，在免疫调节和免疫保护方面发挥着重要作用。例如，一些外膜蛋白可以诱导机体产生特异性抗体，这些抗体能够识别并结合布鲁氏菌，从而阻止其感染宿主细胞；同时，外膜蛋白还能激活机体的细胞免疫应答，增强巨噬细胞、T细胞等免疫细胞的活性，使其能够更有效地清除布鲁氏菌。

鉴于布鲁氏菌外膜蛋白的免疫原性和抗原保护作用，其在布鲁氏菌病的诊断和疫苗开发领域展现出了巨大的潜在价值。在诊断方面，利用外膜蛋白作为诊断抗原，能够提高检测的特异性和灵敏度，有助于早期准确诊断布鲁氏菌病，从而及时采取治疗措施，减少疾病的传播和危害。在疫苗开发方面，外膜蛋白可作为亚单位疫苗的关键组成部分，开发出安全、有效的新型疫苗，为布鲁氏菌病的防控提供有力的技术支持。目前，已有多种布鲁氏菌外膜蛋白被深入研究，如OMP28、OMP2b等，它们在诊断试剂和疫苗研发中取得了一定的进展，为布鲁氏菌病的防控带来了新的希望。

1.3Omp15蛋白研究现状

Omp15蛋白是布鲁氏菌外膜蛋白中的一种，对其结构、功能和特