基因组学概述.pptVIP

第11章基因组与比较基因组学11.1人工染色体构建11.2高通量DNA序列分析技术11.3新的测序方略--全基因组鸟枪法测序11.4全基因组序列分析--基因组学的新内容11.5人类基因组计划11.6比较基因组学(Comparativegenomics)

11.1人工染色体构建1983年，美国的Dana-Farber癌症研究所和哈佛大学医学院的专家初次在Nature上刊登文章，报道了构建YAC（YeastArtificialChromosome）库的过程。1987年，Burke等人发现，仅仅带有ARS序列(autonomousreplicatingsequence)的载体虽然可以被复制，但极易在有丝分裂时丢失。虽然在选择培养基上，也只有5%-20%的子代细胞带有ARS载体。加入Centromeres（CEN）能明显提高ARS质粒在有丝分裂时的稳定性，90%以上子代细胞带有该载体。CEN还能明显减少拷贝数，从20-50/细胞降为1-2/细胞。（Science,236:806-812）。

?人工染色体具有三种必需成分：着丝粒、端粒和复制起点。?着丝粒(CEN)位于染色体中央，呈纽扣状构造，在有丝分裂时结合微管并调控染色体的运动，也是姐妹染色单体配对时的最终位点，接受细胞信号而使姐妹染色体分开。?端粒（TEL）：重要功能是防止染色体融合、降解、保证其完整复制。端粒酶以其自身RNA为模板，在染色体端部添加上端粒反复序列，并参与端粒长度和细胞增殖的调控。

?复制起点：DNA复制一般由起始蛋白与特定的DNA序列互相作用开始。

载体的概念：1.要把一种有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。2.凡来源于质粒或噬菌体的DNA分子，可以插入或克隆DNA片段统称为vector。3.基因工程所用的vector实际上是DNA分子，是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。

载体的分类分类根据类别克隆扩增或体现举例1.按功能提成（1）克隆载体（2）体现载体√√PBR322PCDN32.按进入受体细胞类型分（1）原核载体（2）真核载体（3）穿梭载体PUC8PBUDCE41YE3.按载体来源分病毒载体＋4.按克隆片段得大小（克隆能力）分(1)1kb(2)10kb(3)22kb(4)50kb(5)0.1-0.4Mb(6)0.5-2Mb(1)M13(2)plasmid(3)λphage(4)casmid(5)BAC(6)YAC√

阐明：1.穿梭载体（sbuttlevector）指在两种宿主生物体内复制的载体分子，因而可以运载目的基因（穿梭来回两种生物之间，如：YEP,DIDB2192.YACYeastArtificialChromsome由酵母基因和PBR322质粒衍生物构成，对克隆大的真核基因十分有用，在HGP中发挥重要作用。3.BAC细菌人工染色体。

YAC的重要缺陷1．存在高比例的嵌合体，即一种YAC克隆具有两个本来不相连的独立片段；2．部分克隆子不稳定，在转代培养中也许会发生缺失或重排；3．难与酵母染色体辨别开，由于YAC与酵母染色体具有相似的构造。4．操作时轻易发生染色体机械切割。

以细菌寄主系统为基础的克隆载体形成嵌合体的频率较低，转化效率高，又易于分离。科学家用染色体建造法用F质粒及其调控基因构建细菌载体，克隆大片段DNA。该质粒重要包括oriS，repE（控制F质粒复制）和parA、parB（控制拷贝数）等成分。

BAC的长处1．易于用电击法转化E.coli（转化效率比转化酵母高10-100倍）；2．超螺旋环状载体，易于操作；3．F‘质粒自身所带的基因控制了质粒的复制；4．很少发生体内重排。

有人把人类染色体端粒DNA上单个α-卫星DNA单元多聚化形成1Mb左右的大片段并与人类基因组DNA混合，产生了能被复制、能正常分裂并得到长期稳定保留的人工合成的染色体，长度约为6-10Mb，称为MAC或HAC。

人类基因组线粒体基因组(16.6kb)核基因组(3200Mb)基因外序列基因和基因有关序列约10%约90%专一或中等反复