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苹果应对斑点落叶病：miRNA鉴定及mdm-miR390a功能解析

一、引言

1.1研究背景

苹果作为世界上广泛种植且经济价值极高的水果之一，在全球农业经济中占据着重要地位。然而，苹果在生长过程中面临着多种病害的威胁，其中苹果斑点落叶病是一种极具危害性的常见病害。该病主要由链格孢属苹果专化型（Alternariaalternataf.sp.mali）侵染所致，在各苹果产区均有发生，尤其在渤海湾和黄河故道地区受害较重。其发病特点鲜明，发病早且扩展流行速度快，抗药性强，波尔多液对其几乎无杀菌效果。病斑多且易扩展联片，5月下旬在新梢嫩叶上发病、扩展，一个叶片上病斑可达数个甚至十多个，随后迅速成片，导致叶片短时间内干枯、脱落。同时，品种间抗病性差异显著，元帅系发病重，富士系发病相对较轻。

苹果斑点落叶病主要危害叶片，也会对嫩枝及果实造成侵害。叶片发病初期出现褐色小斑点，周围伴有紫褐色晕圈，条件适宜时，多个病斑相连，最终叶片干枯脱落，天气潮湿时，病斑背面会长出黑色霉层。幼嫩叶片受侵染后会皱缩、畸形。叶柄及嫩枝受害后，产生椭圆形褐色凹陷病斑，致使叶片易脱落，柄枝易折断、干枯。果实在近成熟期受害时，果面产生褐色斑点，果实上的黑褐色霉层可向果肉扩大。该病的发生、流行与气候、品种紧密相关，高温多雨的环境易发病，春季干旱年份，始发期延迟；夏季降雨多，则发病重。树势较弱、通风透光不良、地势低洼、地下水位高、枝细叶嫩等情况均易引发该病。

病害的发生严重影响苹果的生长发育，导致叶片早期脱落，削弱树势，进而降低果品的产量和质量，还会使果实贮藏期容易感染其他病菌，造成腐烂，给苹果产业带来巨大的经济损失。据相关研究统计，在发病严重的年份和地区，苹果减产可达30%-50%，果实品质下降，商品价值降低，严重制约了苹果产业的可持续发展。因此，深入研究苹果对斑点落叶病的抗性机制，寻找有效的防治方法迫在眉睫。

MicroRNAs（miRNAs）是一类在真核生物中广泛存在的内源性非编码小分子RNA，长度一般为19-24nt。它们在植物的生长发育、信号转导以及应对生物和非生物胁迫等众多过程中发挥着关键的调控作用。在植物应对病原菌侵染的过程中，miRNA介导的基因沉默是主要的基因表达调控途径之一。响应病原菌侵染的寄主miRNA，既可能激活植物免疫反应，从而赋予寄主抗病性，也可能被病原菌利用，促进病原菌的入侵和定殖。深入研究植物在病原菌侵染下miRNA的表达调控机制，对于揭示植物抗病的分子机制具有重要意义。目前，关于苹果响应斑点落叶病过程中miRNA的作用及调控机制的研究还相对较少，这为我们的研究提供了广阔的探索空间。因此，开展苹果响应斑点落叶病miRNA的鉴定及功能研究，对于揭示苹果抗病分子机制、培育抗病品种以及有效防控苹果斑点落叶病具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的和意义

本研究旨在通过高通量测序技术结合生物信息学分析，系统地鉴定苹果在响应斑点落叶病过程中差异表达的miRNA，并深入研究其中mdm-miR390a的功能及作用机制。具体目的如下：首先，全面鉴定苹果在受到斑点落叶病菌侵染后，体内miRNA表达谱的变化，筛选出与抗病相关的关键miRNA；其次，对筛选出的mdm-miR390a进行功能验证，明确其在苹果抵御斑点落叶病过程中的作用；最后，深入探究mdm-miR390a调控苹果抗病性的分子机制，解析其与靶基因之间的相互作用关系。

本研究具有重要的理论意义和实践价值。在理论方面，有助于深入揭示苹果响应斑点落叶病的分子调控机制，丰富植物与病原菌互作的理论知识。目前，对于苹果应对斑点落叶病的分子机制研究尚不全面，miRNA在这一过程中的作用机制更是有待深入挖掘。通过本研究，能够进一步明确miRNA在苹果抗病过程中的调控网络，为后续研究提供重要的理论基础。在实践方面，为苹果抗病品种的选育提供新的分子靶点和理论依据，有助于培育出更具抗病性的苹果新品种，从而减少病害对苹果产业的危害，提高苹果的产量和质量，促进苹果产业的可持续发展。此外，本研究结果还可能为其他植物抗病研究提供借鉴和参考，推动植物抗病领域的发展。

1.3国内外研究现状

1.3.1苹果斑点落叶病研究进展

苹果斑点落叶病在国内外均受到广泛关注，众多学者对其发病规律、防治方法等方面进行了深入研究。在发病规律方面，研究发现病原菌以菌丝在受害叶、枝条或芽鳞中越冬，翌春产生分生孢子，借助气流、风雨传播，从气孔侵入进行初侵染。叶龄20天内的嫩叶易受侵染，30天以上叶则不再感病。6月上中旬是病原菌初侵染期，发病高峰期在7-8月，一直可危害到10月中旬。高温多雨的气候条件易发病，春季干旱年份，始发期延迟；夏季降雨多