反义核酸药物剖析.pptVIP

反义核酸药物;;;反义核酸：是指与靶DNA或RNA碱基互补，并能与之特异性结合的一段DNA或RNA。

一般包括:

反义DNA（antisenseDNA）

反义RNA（antisenseRNA）

核酶（ribozyome）:是具有酶活性的RNA，重要参与RNA的加工与成熟。;反义寡聚核苷酸（antisenseoligonucleotides，asON）：目前研究的热点。是一小段与mRNA或DNA特异性结合并阻断其基因体现的人工合成的短核酸片断。

反义核酸技术：是指运用反义核酸的特异性来克制某些基因体现技术。

反义药物：运用这一技术研制的药物。;反义核酸可特异性地作用于靶基因或mRNA，从基因复制、转录、剪接、转运和翻译等各个环节上调控基因的体现，从而实现疾病的治疗。;反义寡核苷酸作为药物比常规药物的治疗有更高的特异性。

;国外已经有反义药物应用于临床,Ｓｃｉｅｎｃｅ杂志1998年7月报道了第一种通过ＦＤＡ认证的反义药物,即用于治疗艾滋病人巨细胞病毒感染的视网膜炎的福米韦生(Ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ,Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ),这是ISIS企业的一大成果,此外尚有多种反义药物包括核酶在内的新一代反义药物进入临床。;二、反义药物的作用机理;1、在DNA复制水平上：

反义RNA可作为DNA复制的克制因子，它可与引物RNA互补结合，克制DNA的复制，从而控制复制频率。

;该质粒复制起始时，引物(RNAII)与其模板链结合，并在DNA聚合酶参与下合成新的DNA子链。不过很快就有一种长约100个核苷酸的反义RNA分子(RNAI)生成。RNAI与RNAII-552----447核苷酸互补,且互补区位于复制起始位点上游,它在ColE1复制过程中能与RNAⅡ的5’-末端互补结合，使其构型变化，从而阻碍了RNAⅡ与DNA模板链的结合，RNAⅡ不再起到引物的作用，质粒DNA的复制终止。见图示：

;ColicinImmunity

Protein;2、在转录水平上：

反义RNA可与mRNA5’-端互补,从而制止了RNA的完整转录。

大肠杆菌的cAMP受体蛋白基因（CRP)的转录会受到一种小分子反义RNA的制约。这种反义RNA可与CRP基因转录起始生成的mRAN分子的5’-端序列互补，形成特异的二级构造，它类似于能促使转录作用终止的柄-环构造，???间构象障碍迫使RNA聚合酶脱离DNA模板，停止转录。

;;;

;GGAGG;;;1、作用于mRNA5’-末端，制止帽子构造的形成；

2、作用于外显子和内含子的连结区，制止前体mRNA的剪接；

3、作用于PolyA形成位点，制止mRNA的成熟及向胞浆的转运；

4、与mRNA结合，使得mRNA易被酶识别而被降解，从而使蛋白质的体现受到克制。;;核酶(Ｒｉｂｏｚｙｍｅ)技术;此外,在核酶基础上,人们又提出了反义核酶的概念,即通过基因连接将反义ＲＮＡ与核酶的基因连为一体,再转录得到具有双重功能的一类ＲＮＡ分子,对靶基因既有封闭作用,又有切割作用。目前核酶在基因治疗领域中颇受瞩目,属研究热点。

核酶药物近年来运用反义核酸和核酶进行抗病毒治疗已经有进展。将核酶基因以合适的载体导入细胞内，在细胞内转录产生核酶，从而发挥抗病毒作用。

;反义RNA调整翻译的基本原理是：;特点

选择性强:asON只作用于靶基因,不与非有关基因作用,特异性高，且片断短,合成以便、经济;

效率高:asON几乎可以完全阻断靶基因的翻译;

低毒:asON作用于局部,对全身影响小。;反义核酸药物是药理学的新领域或革命:

新的药物——反义寡核苷酸

新的药物受体——mRNA

新的受体结合方式——Watson-Crick杂交

新的药物受体结合后反应:

（1）RNaseH介导的靶RNA的降解；

（2）克制DNA的复制和转录及转录后的加工和翻译等。

;设计

能特异地识别靶基因,并能与之稳定结合;

有较长的半衰期及较强耐受核酸酶消化的能力;

能通过靶细胞膜,有效的抵达作用部位。;导入措施;四、反义核酸类药物必需符合的条件

;这些区段均为基因体现的关键区或敏感区,对基因的调控起重要的作用。

一般而言,只要人工设计合成15----20个碱基长度的反义ＤＮＡ或反义ＲＮＡ,就足以使此反义核酸与靶ｍＲ