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万寿菊类胡萝卜素合成关键基因PSY与CCS克隆及再生体系构建研究

一、引言

1.1研究背景与目的

万寿菊（TageteserectaL.），作为菊科万寿菊属的一年生草本植物，原产于墨西哥，如今在全球各地广泛种植。它不仅具有极高的观赏价值，花朵大且色彩艳丽，花期长，常被用于园林绿化，布置花坛、花境等，能为环境增添绚丽色彩；还具备重要的药用价值，其花和叶可入药，有着清热化痰、补血通经、去瘀生新等功效，在民间医药领域应用广泛。此外，万寿菊还是一种重要的经济作物，含有丰富的类胡萝卜素，这使其在食品、医药、化妆品等行业展现出巨大的应用潜力。

类胡萝卜素是一类广泛存在于植物、藻类和某些细菌中的天然色素，其种类繁多，已被鉴定出的超过700种。在植物中，类胡萝卜素不仅赋予了植物花朵、果实鲜艳的颜色，有助于吸引昆虫传粉和传播种子；还在光合作用中发挥关键作用，能够保护光合机构免受强光的伤害，参与光捕获和能量传递过程。从对人体健康的影响来看，类胡萝卜素是人体内维生素A的重要来源，并且具有强大的抗氧化、抗衰老、免疫调节以及抗癌等功效。比如，β-胡萝卜素可以在人体内转化为维生素A，对维持视力、促进生长发育至关重要；叶黄素具有抗氧化和光过滤作用，能够保护视力，预防白内障等眼科疾病。在食品工业中，类胡萝卜素常被用作天然色素，替代合成色素，用于饮料、糕点、糖果等食品的着色，以满足消费者对健康食品的需求；在医药领域，类胡萝卜素因其抗氧化和免疫调节等功能，被应用于保健品和药品的研发，用于预防和治疗一些与氧化应激相关的疾病；在化妆品行业，类胡萝卜素的抗氧化特性使其成为护肤品的重要成分，有助于延缓皮肤衰老，减少皱纹和色斑的产生。

八氢番茄红素合成酶（PSY）和胡萝卜素裂解双加氧酶（CCS）是类胡萝卜素合成途径中的关键酶。PSY催化两分子的香叶基香叶基焦磷酸（GGPP）缩合形成八氢番茄红素，这是类胡萝卜素合成的第一步，也是限速步骤，对类胡萝卜素的合成起着关键的调控作用。CCS则参与类胡萝卜素的裂解代谢，将类胡萝卜素裂解为不同的产物，这些产物在植物的生长发育、信号传导以及香气物质的形成等方面发挥着重要作用。深入研究PSY和CCS基因，对于揭示类胡萝卜素的合成机制，进而通过基因工程手段提高植物中类胡萝卜素的含量和品质具有重要意义。

目前，虽然对万寿菊类胡萝卜素合成途径已有一定研究，但对于PSY和CCS基因的克隆及功能验证仍有待深入。同时，高效稳定的万寿菊再生体系的建立是进行基因转化和功能研究的基础，但现有的再生体系还存在再生频率低、周期长等问题。本研究旨在克隆万寿菊类胡萝卜素合成途径中的关键基因PSY和CCS，并对其进行生物信息学分析和表达特性研究；同时，优化万寿菊再生体系，提高再生频率和效率。通过这些研究，为深入了解万寿菊类胡萝卜素合成的分子机制奠定基础，为利用基因工程技术培育高类胡萝卜素含量的万寿菊新品种提供理论依据和技术支持。

1.2国内外研究现状

在万寿菊类胡萝卜素合成基因克隆方面，国外研究起步较早。Moehs等克隆了万寿菊类胡萝卜素合成途径中的多个基因，并分析了这些基因在不同万寿菊品种中的表达差异，发现基因表达的差异与类胡萝卜素合成和积累的差异密切相关。随着研究的深入，对于PSY基因，国外学者通过转基因技术将其导入不同植物中，验证了PSY基因在调控类胡萝卜素合成中的关键作用。例如，将PSY基因导入番茄中，显著提高了番茄果实中类胡萝卜素的含量。在CCS基因研究方面，国外也有学者对其进行了克隆和功能分析，发现CCS基因的表达与植物中类胡萝卜素的裂解代谢以及香气物质的形成有关。

国内对于万寿菊类胡萝卜素合成基因的克隆研究也取得了一定进展。赵鹏雪等克隆了万寿菊类胡萝卜素合成途径关键基因TeCCS和TePSY，并进行了同源性分析，为进一步研究基因功能奠定了基础。此外，国内学者还通过实时荧光定量PCR等技术，研究了PSY和CCS基因在万寿菊不同生长发育时期以及不同组织中的表达模式，为揭示基因的调控机制提供了依据。

在万寿菊再生体系建立方面，国外研究主要集中在优化培养基成分和培养条件上。通过添加不同种类和浓度的植物生长调节剂，如生长素、细胞分裂素等，来提高万寿菊的再生频率。同时，研究光照、温度、湿度等环境因素对再生的影响，以建立高效的再生体系。

国内在万寿菊再生体系研究方面也做了大量工作。吴丽芳等以色素万寿菊雄性不育株的叶片和茎段为外植体，研究不同生长调节剂组合对愈伤组织诱导、不定芽分化及生根培养的影响，建立了适宜色素万寿菊离体快繁的技术体系。还有学者通过调整培养基的营养成分，如添加不同的碳源、氮源等，来优化万寿菊再生体系。