沙冬青低温诱导基因：原核表达特性与转基因烟草抗寒机制解析.docxVIP

沙冬青低温诱导基因：原核表达特性与转基因烟草抗寒机制解析

一、引言

1.1研究背景

温度是影响植物生长、发育和地理分布的关键环境因素之一。低温胁迫作为一种常见的逆境，严重威胁着植物的生存与繁衍。当植物遭受低温时，细胞膜流动性降低，从液晶态转变为凝胶态，这不仅影响了膜上蛋白的功能，还导致物质运输受阻，细胞内离子平衡失调。低温会抑制光合酶活性，如RuBisCO羧化酶活性降低，使得光能利用率下降，二氧化碳固定效率降低，进而影响植物的碳水化合物合成与积累。呼吸作用也会因低温而减弱，线粒体中呼吸链上的酶活性受到抑制，导致能量产生不足，无法满足植物正常生理活动的需求。水分吸收同样受到阻碍，低温使根系活力下降，根细胞的吸水能力减弱，而蒸腾作用却因气温降低而减弱不明显，这就导致植物体内水分分布失衡，出现生理干旱现象。蛋白质与RNA合成也会受阻，低温影响了核糖体的活性以及转录和翻译相关酶的活性，干扰了正常的代谢活动。

在形态结构方面，低温抑制细胞分裂与伸长，导致植株生长缓慢甚至停滞。叶片因营养运输不畅，可能出现卷曲、黄化、产生斑点等症状。根系发育不良，根尖生长受到抑制，毛细根数量减少，影响植物对养分和水分的吸收。在果实发育方面，低温会影响花粉萌发及授粉过程，导致果实膨大受限，出现畸形果或落果现象。

全球气候的不稳定性加剧，极端低温事件愈发频繁，给农业生产、生态系统平衡带来了巨大挑战。据统计，每年因低温灾害造成的农作物减产损失高达数十亿美元，许多地区的森林生态系统也因低温胁迫面临树种更替、森林衰退等问题。因此，深入研究植物的抗寒机制，挖掘植物的抗寒基因资源，对于提高植物的抗寒能力，保障农业生产安全和生态系统稳定具有重要的现实意义。

1.2沙冬青简介

沙冬青（Ammopiptanthusmongolicus(Maxim.exKom.)Chengf.），隶属于豆科沙冬青属，是亚洲中部旱生植物区系中古老的第三纪残遗种，被列为国家二级重点保护野生植物，也是IUCN易危种（VU）。其主要分布于我国内蒙古中西部、宁夏北部和甘肃北部，最集中且适宜生长的区域是西鄂尔多斯—东阿拉善地区的沙漠边缘和山麓洪积砾质坡地，在蒙古、中亚地区也有少量分布。

沙冬青为常绿灌木，株高可达2米，多叉分枝，茎条呈黄绿色。叶以三小叶和单叶为主，偶见二小叶，披针形，叶片和叶柄均密被灰白色短绒毛，这种特殊的结构有助于减少水分蒸发，适应干旱的荒漠环境。每年4-5月份，沙冬青绽放出黄色蝶形花冠，花朵互生长满枝条顶端，总状花序上小花数量达8-12朵，随风摇曳，颇为艳丽。5-6月结果，荚果线形扁平，内有圆肾形种子2-5粒。

沙冬青具有极为出色的抗寒能力，能忍受冬季-30℃的低温。其抗寒机制涉及多个层面，在生理生化方面，低温胁迫下，沙冬青会提高细胞膜的稳定性，增加不饱和脂肪酸含量，降低膜脂相变温度；增加脯氨酸、可溶性糖等渗透调节物质的积累，调节细胞渗透压，防止细胞脱水；调节抗氧化酶系统活性，如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）等，清除体内过多的活性氧（ROS），减轻氧化损伤；调节生长激素含量，如脱落酸（ABA）含量增加，诱导抗寒基因表达，提高抗寒能力。在形态结构方面，沙冬青的根系极为发达，主根粗壮，侧根众多，能深入地下获取水分和养分；叶片为典型的等面叶，上下表皮皆具浓密的表皮毛，角质层很厚，叶肉细胞紧密排列全部栅栏化，栅栏组织十分发达，海绵组织退化，这些结构特征有助于减少水分散失和热量交换，增强其抗寒能力。

1.3低温诱导基因相关研究进展

植物在低温胁迫下，会诱导一系列基因的表达，以适应低温环境。根据基因表达的蛋白产物，这些低温诱导基因可分为编码功能蛋白基因和调节蛋白基因两大类。

编码功能蛋白的基因直接参与细胞的保护和修复过程。其中，渗透调节物质合成相关基因，如脯氨酸合成酶基因、甜菜碱合成酶基因等，在低温胁迫下表达上调，促使植物积累脯氨酸、甜菜碱等渗透调节物质，提高细胞液浓度，降低冰点，防止细胞脱水。抗冻蛋白基因表达产生的抗冻蛋白，能吸附在冰晶表面，抑制冰晶生长和重结晶，保护细胞免受冰晶损伤。热休克蛋白基因表达的热休克蛋白，可帮助其他蛋白质正确折叠、组装和转运，修复因寒冷造成的蛋白质损伤。此外，一些基因参与细胞膜脂肪酸的不饱和化过程，如脂肪酸去饱和酶基因，其表达产物可增加细胞膜中不饱和脂肪酸含量，维持细胞膜的流动性和稳定性。

调节蛋白基因主要负责传递信号和调控基因表达。转录因子基因在这一过程中起着关键作用，如CBF（C-repeatbindingfactor）转录因子基因，在低温胁迫下迅速表达，其编码的CBF蛋白能与下游COR（cold-regulated）基因启动子区域的CRT/DR