《甘蔗品种SNP分子检测技术规程.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

PAGE2

ICS

FORMTEXT65.020

CCS

FORMTEXTGXAS

FORMTEXTB21

团体标准

T/FORMTEXTGXASFORMTEXTXXX—FORMTEXT2025

FORMTEXT?????

FORMTEXT甘蔗品种SNP分子检测技术规程

FORMTEXTVarietyIdentificationforSugarcane(Saccharum.spp.L)UsingSNPMarkers

FORMDROPDOWN

FORMDROPDOWN

FORMTEXT2025-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXT2025-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西标准化协会??发布

T/GXASXXXX—2025

PAGE

PAGE2

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由福建农林大学、广西大学提出并宣贯。

本文件由广西标准化协会归口。

本文件起草单位：福建农林大学、广西大学、广东省科学院南繁种业研究所。

本文件主要起草人：赵新旺、张木清、邓祖湖、暴怡雪、赵薇彤、黄江锋、王勤南、姚伟、徐良年、吴嘉云、胡琴、张南南、张垂明、余凡、蒋洪涛、肖胜华、张伟。

FORMTEXT甘蔗品种SNP分子检测技术规程

范围

本文件规定了构建甘蔗(Saccharumspp.hybrid)品种SNP分子标记指纹图谱的原理、检测方案、检测程序和结果判定。

本文件适用于构建甘蔗常规品种的SNP分子标记指纹图谱和身份鉴定。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.5农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

品种真实性验证varietyverification

与其对应品种名称的标准样品比较，检测并证实供检样品品种名称与标注是否与标准品种样品相符。

多重PCRmultiplexPolymeraseChainReaction，mPCR

在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。

连接酶检测反应LigaseDetectionReaction，LDR

在TaqDNA连接酶的作用下，当左右两条寡核苷酸探针与目的DNA序列完全互补，并且两条探针之间没有空隙时才能发生连接反应，最后通过荧光扫描片段长度，实现对SNP位点的检测。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

bp：basepair碱基对

CTAB：cetyltrimethylammoniumbromide十六烷基三甲基溴化铵

DNA：deoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸

PCR：polymerasechainreaction聚合酶链式反应

LDR：ligasedetectionreaction连接酶检测反应

SNP：singlenucleotidepolymorphisms单核苷酸多态性

仪器设备及试剂

仪器设备及试剂见附录A，所用试剂均为分析纯。试剂配制所用水应符合GB/T6682规定的一级水的要求。

溶液配制

溶液配制见附录B。

SNP标记

一套甘蔗品种真实性检测SNP标记包括177个核心SNP标记、位点及物理位置见附录C。

引物信息

引物分为多重PCR引物、连接引物见附录D。

检测程序

样品准备

采集甘蔗叶片样品重量应不低于3g，并用自封袋包装，冰盒携带，4℃条件下保存。用混合样品检测的，每个个体上等量取样，混合后提取DNA。采集种茎的，常温运送，温室种植，待长出真叶后采集叶片取样，方法同上。采样脱毒组培瓶苗的，在提取DNA前不开瓶，防止污染。样品在4℃下可以保存2周，在-20℃下可以保存6个月，在-80℃下可以长期保存。设标准样品，与样品采集同样方法。

从供检样品中分别取出有代表性、符合GB/T3543.2规定的试样，采用混合样或单个个体进行检测试样来源应至少含有3个个体。

DNA样品准备

参照GB/T19495.3的