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耐酸蛋白酶高产菌株选育及发酵工艺优化

目录

文档综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.1蛋白酶工业应用现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

1.1.2耐酸性蛋白酶的特殊价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.1.3本研究的现实需求与理论价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.2国内外研究进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

1.2.1耐酸微生物资源调查．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

1.2.2耐酸蛋白酶产生菌研究概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

1.2.3蛋白酶高产菌株筛选技术回顾．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

1.2.4发酵工艺优化方法概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

1.3研究目标与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

1.3.1主要研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

1.3.2具体研究任务．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

1.4技术路线与研究方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

1.4.1技术实施方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

1.4.2项目预期成果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

耐酸蛋白酶产生菌的分离与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.1实验材料与主要设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

2.1.1样品来源与选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.1.2培养基组成与配制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.1.3主要仪器与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

2.2耐酸菌株的初筛．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

2.2.1样品处理与富集．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．50

2.2.2选择性培养策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51

2.2.3初筛方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．54

2.3耐酸菌株的复筛与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．56

2.3.1耐酸性测定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57

2.3.2蛋白酶活性测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

2.3.3菌株纯化与保存．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61

2.4耐酸菌株的形态学与分子生物学鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

2.4.1形态学观察描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．64

2.4.216SrRNA基因序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．66

2.4.3菌种鉴定与命名．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．70

耐酸蛋白酶高产菌株的遗传改良．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．74

3.1选育方法的探索．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．76

3.1.1物理诱变育种．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．78

3.1.2化学诱变育种．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

3.1.3环境胁迫驯化选育．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．