植物组织培养的基本技术.pptVIP

（二）外植体培养温度：常保持在25±2℃光照时数：大多数情况下为12-16h。（暗培养不需要光照，例如起始培养的前几天不需要光照）光照强度：1000—3000lx，白色荧光灯，光的作用是满足形态建成的需要（诱导）。相对湿度：培养室的相对湿度一般不控制。根据需要适当调整培养间湿度三、外植体的接种和培养定期检查和细胞学观察进行培养的材料，应定期检查，特别是接种后的3～7天内，要每天检查，主要是检查其污染情况，发现污染材料，应及时处理掉。没有污染的就是得到的无菌材料。如果它们能生长，增殖，并通过继代培养，就建立了无菌培养系。细胞学观察一般每隔3～5天观察一次，可用肉眼观察其形态变化，也可用显微镜进行观察，如平板培养可进行定点观察，液体培养可用倒置显微镜观察，观察到的结果及时记录。三、外植体的接种和培养（1）在愈伤组织上同时长出芽和根，以后连成统一的轴状结构（较少），育成植株；（2）在愈伤组织中先形成茎，后诱导成根，再发育成植株；（3）在愈伤组织中先形成根，再诱导出芽，得到完整植株。但在培养中一般先形成根的，往往抑制芽的形成；而相反，一般先产生芽的，则以后较易产生根。1．外植体先形成愈伤组织，再分化成完整的植株。四、外植体的成苗途径2．胚状体发生组织培养中再生植株可通过与合子胚相似的胚胎发生过程，即形成胚状体，再发育成完整植株。胚状体可以从以下几种培养物产生：直接从器官上发生；愈伤组织发生；从游离单细胞发生；从小孢子发生。四、外植体的成苗途径3．外植体经诱导后直接形成根与芽，发育成完整的植株如茎尖、花芽、叶片、花托、鳞片等组织直接产生小苗，形成小苗（芽）之前也形成少量的愈伤组织。利用侧芽进行分化和增殖，如菊花、倒挂金钟。利用在叶外植体的周围再分化出芽，如烟草。四、外植体的成苗途径利用从鳞茎分化芽或小鳞茎，如百合，水仙。4．原球茎型大部分兰花的培养属于这一类型。原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖或腋芽可直接产生原球茎，继而分化成植株，也可以继代增殖产生新的原球茎，这取决于培养条件和培养基。四、外植体的成苗途径四、外植体的成苗途径外植体愈伤组织根、芽芽根根芽胚状体芽、根试管苗本章小结1．进行植物组织培养需要哪些设备？各有何作用?2．植物组织培养主要包括哪些环节?各环节的主要工作内容是什么?3．培养基包括哪些基本成分?其作用是什么?如何配制?4．如何对外植体、培养基、培养器皿、接种器械进行灭菌？复习思考题***计算：制做3LMS+6-BA2mg/l+NAA0.1mg/l+蔗糖3%+琼脂0.6%需要母液各多少？大量元素母液（10倍）——？微量元素母液（100倍）——？铁盐母液（100倍）——？有机物质母液（100倍）——？6-BA母液(1mg/ml)——？NAA母液(0.1mg/ml)——？蔗糖——？琼脂——？培养基的灭菌培养基一般采用湿热灭菌法，温度为121℃-123℃，维持20min，即可达到灭菌的目的。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。但时间过短，不能保证灭菌的效果，易引起培养基污染。培养基储藏在4～10℃的条件下。培养基蒸气灭菌所需的最少时间容积/容器（ml）在121℃下所需要灭菌时间20~5015min7520min250~50025min100030min150035min200040min123456