细胞生物学翟中和第三章讲课文档.pptVIP

细胞生物学翟中和第三章第一页，共80页。

一、光学显微镜（一）普通光学显微镜1、构成：①照明系统②光学放大系统③机械装置2、原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。细胞生物学第二页，共80页。

细胞生物学第三页，共80页。

细胞生物学第四页，共80页。

3.分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。R=0.61λ/N．A．其中λ为入射光线波长；N．A：为镜口率＝ｎsinα/2，n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角）。思考：如何提高显微镜的分辨能力？细胞生物学第五页，共80页。

表一、几种介质的折射率细胞生物学第六页，共80页。

显微镜的几个光学特点：制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。sinα/2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于.2μm，人眼的分辨力为0.2mm,因此显微镜的最大设计倍数为1000X。细胞生物学第七页，共80页。

（二）相差和微分干涉显微技术干涉:两列频率相同的光波在空中相遇时发生叠加，在某些区域总加强，在另外一些区域总减弱，出现明暗相间的条纹或者是彩色条纹的现象叫做光的干涉。细胞生物学第八页，共80页。

相差显微镜把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。1、环形光阑（annulardiaphragm）：位于光源与聚光器之间。2、相位板（annularphaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。细胞生物学第九页，共80页。

细胞生物学第十页，共80页。

用途：观察未经染色的玻片标本细胞生物学第十一页，共80页。

微分干涉显微镜1952年，Nomarski发明，微分干涉显微镜是以平面偏振光为光源，光线经棱镜折射后分成两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然后经过另一棱镜将这两束光汇合，从而样品中厚度上的微小差别就会转化成明暗区别，增加了样品反差，造成了标本的人为三维立体感，类似大理石上的浮雕。微分干涉显微镜适于研究活细胞中较大的细胞器，如果接上录像装置可以记录活细胞中的颗粒以及细胞器的运动。细胞生物学第十二页，共80页。

（三）荧光显微镜特点：光源为紫外线，波长较短，分辨力高于普通显微镜；有两个特殊的滤光片；照明方式通常为落射式。细胞生物学第十三页，共80页。

细胞生物学第十四页，共80页。

用于观察能激发出荧光的结构。用途：免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断。Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen细胞生物学第十五页，共80页。

（四）激光共聚焦扫描显微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。能显示细胞样品的立体结构。分辨力是普通光学显微镜的3倍。用途类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。细胞生物学第十六页，共80页。

laserconfocalscanningmicroscope,LCSM细胞生物学第十七页，共80页。

细胞生物学第十八页，共80页。

LCSMImageofaXenopusMelanophoremicrotubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)细胞生物学第十九页，共80页。

(五)荧光共振能量转移技术CFP的发射光谱与YFP的吸收光谱有相当的重叠，当它们足够接近时，用CFP的吸收波长激发，CFP的发色基团将会把能量高效率地共振转移至YFP的发色基团上，所以CFP的发射荧光将减弱或消失，主要发射将是YFP的荧光。细胞生物学第二十页，共80页。

细胞生物学第二十一页，共80页。

应用:1、检测酶活性变化2、关于膜蛋白的研究3、细胞膜受体之间相互作用4、细胞内分子之间相互作用细胞生物学第二十二页，共80页。

(六)荧光漂白恢复技术FRAP(光漂白后荧光恢复)就是在光漂白后对样本确定区中的荧光恢复。FRAP是由没有漂白的荧光团由周围进入漂白区FRAP的运动引起的。FRAP用于测量2-维或3-维分子运动的力度。分子运动包括膜或活细胞内用荧光标明的分子的扩散、转移或其他类型的运动。细胞生物学第二十三页，共80页。

二、电子显微镜（一）电子显微镜的基本知识1、电子显微镜与光学显微镜的基本区别细胞生物学第二十四页，共80页。