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第十七章流式细胞仪分析技术及应用
第一节概述
流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成
一、工作原理
采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光与单克隆抗体技术结合
的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号
进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析的精确性。
标记了特异性荧光的单细胞悬液和鞘液，分别经硅化管进入流动室，形成鞘液包裹细胞悬液的稳
态单细胞液柱，液柱与水平方向的激光束垂直相交，单个细胞上标记的荧光在通过激光光斑时被激发
而产生特异性荧光，同时，由于混合细胞群中因细胞大小和胞内颗粒多少的不同会被激发而产生不同的散
射光
一台好的流式细胞仪每秒可测量15000个细胞，测定1000个荧光分子的粒子。
二、散射光的测定
（一）前向散射光激光束照射细胞时，光以相对轴较小的角度（0.5°～10°）向前方散射讯号。FS
信号的强弱与细胞的体积成正比，因此可以说FS是用于检测细胞或其他粒子物体的表面属性。
（二）侧向散射光激光束照射细胞时，光以90°角散射的讯号。SS信号的强弱与细胞或其他颗粒形
状及粒度成正比。SS用于检测细胞结构属性。
三、荧光测量
荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光受激光激发后产生，的荧光波长与激发光波长不相
同。每种荧光都有特定的激发波长，激发后又产生特定波长荧光。通过一些波长选择通透性滤光片，
可将不同波长的散射光、荧光信号区分开。选择不同的单克隆抗体及荧光可以利用流式细胞仪同时测
定一个细胞上的多个不同特征。
（一）荧光信号测量与放大器
线性放大器用于测量信号强度变化范围较小的信号或具有生物学线性过程的信号，如前向散射光的测
量与CD3+细胞指数的测量。
对数放大器用于测量信号强度变化范围较大且其光谱信号较复杂的信号，在免疫测量中最常使用。
（二）荧光补偿
依靠滤光片是不能完全阻挡干扰信号，在每两种荧光的光信号中仍有不可避免的现象。该重
叠区越大，信号检测的准确性越差。通常采用荧光补偿的方法来消除信号，保证检测信号的准确性。
四、细胞分选原理
（一）分选的基本原理
当细胞悬液形成液流柱流经流动室，由于振动形成液滴。被设定了分选参数的细胞的会被充电而带有
电荷，未被设定分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场时，
依所带电荷是正或是负而发生向右或向左偏转，落入指定的收集器中，完成细胞分选的目的。
1.分选速度：至少达5000个/秒左右。
2.分选纯度与仪器的精密度直接相关，同时与被分选细胞与细胞悬液中其他细胞有无相互的生
物学特性密切相关。
3.分选收获率是指设定通过测量点的分选细胞与实际收获的分选细胞之间的比率。收获率的高低与
被分选细胞和不选细胞间的生物学特性是否有关。当被要求分选的细胞纯度高，收获率相对低。
Chapter17FlowCytometryAnalysisTechnologyand
Application
Section1
Overview
Theflowcytometerconsistsofthreebasicstructures:aliquidflowsystem,anopticalandsignalconversiontestsystem,a
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