第六胚胎工程讲课文档.ppt

第六胚胎工程;优选第六胚胎工程;一、胚胎发育的基本过程和机制;（一）精卵的发生;1.精子

a.精子的结构;b.精子的发生;精原细胞;卵细胞内部物种空间结构排列具有极性，卵内组分沿着卵的主轴分布不均匀，形成动物级和植物级。卵黄积聚在植物级。

卵细胞分布在两个固定的区域，质膜下细胞质称为皮层，皮层是高度粘滞、半硬的凝胶状，内含有皮层颗粒和色素颗粒。大部分卵细胞质——内质是液体状态，内含线粒体和生殖质。

卵细胞排出卵巢后，有卵膜包被;b.卵子的发生;卵巢激素控制示意图;b.卵子的发生;c、过程：;卵原细胞;3、精子与卵子的发生比较;（二）受精作用

概念:指精子和卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。

标志:在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时。

场所:受精是在输卵管内完成的。

;1.精子的成熟和获能

精子离开精巢后，无使卵受精的能力，它必须经过在附睾中成熟及在雌性生殖道内获能，才具有使卵受精的能力。

在附睾液和精液中存在着附睾蛋白和精清蛋白，称为去获能因子，精液中的精子表面被覆了这种因子。

在雌性生殖道中的分泌物可以去掉这些覆盖物而使精子质膜、顶体发生一系列变化;b.受精前的准备阶段;2.顶体反应;;;5.精卵融合过程

（受精过程）;;精、卵相遇;7.卵子的激活

精子一旦与卵子接触，卵子本身就开始发生一系列深刻的变化，即卵子的激活。

卵子激活时，皮层颗粒首先于接触点发生破裂，然后波及整个卵子的皮层，发生皮层反应。

皮层颗粒内含物被排出，一部分与卵外的卵黄膜一起形成受精膜，防止多精受精。另一部分留在卵子和受精膜间的卵周隙中，吸收水分，结果使受精膜逐渐与卵子分开而举起。

皮层颗粒排放出的粘多糖形成一种粘性的透明膜物质，与卵表面紧密相粘，作用是保持随后的分裂球聚集在一起。;8.多精受精的阻止;9.原核变化及融合;;受精和胚胎发育全过程;（三）动物胚胎发育及其分子机制;哺乳动物胚胎发育的基本过程;胚胎发育;强调：卵裂期的特点;胚胎发育;哺乳动物胚泡着床;第35页，共106页。;二、体外受精（invitrofertilization，IVF）

就是将哺乳动物卵母细胞从??体取出，在体外进行精卵结合的过程。

由于体外受精在实验室进行，所以得到的动物或人称为“试管动物”或“试管婴儿”。;第37页，共106页。;（一）体外受精的研究历史;试管小鼠(Whit-tingham，1968)

大鼠(Toyoda和Chang，1974)

婴儿(Steptoe和Edwards，1978)

牛(Brackett等，1982)

山羊(Hamda，1985)

绵羊(Hanada，1985)

猪(Chang等，1986)

牛（Parrish等，1986）;（二）体外受精技术

主要包括以下几个主要方面：精子的采集与获能、卵母细胞的采集及成熟培养、体外受精、受精卵的体外发育及试管胚胎的移植等。;采集良种母牛的卵母细胞;1.卵母细胞的采集和成熟培养;（1）卵母细胞的采集

①超数排卵:如果一次要获得多个卵，可以利用促性腺激素处理，使得卵巢中有更多的卵泡发育，更多的卵被排出，这个过程就称为超数排卵（superovulation）.

如在小鼠Ⅳ－Ⅴ期涂片相时注射5－10IUPMSG(血清促性腺激素)，48－50小时后，再于皮下或腹腔注射5－10IUhCG(人体绒膜促性腺激素)，这种方法可以获得超数排卵。

;②从活体卵巢中采集卵母细胞

以鼠为例：为防止干燥可将屠杀后取出的输卵管放在平皿内，用石蜡油覆盖，在实体显微镜下找到输卵管膨部，用磨尖的钟表镊子，切开输卵管膨大部，从内容物溢出而找到卵。

对于稍大一些的动物可以用活体输卵管采卵，腹部正中线切开，找出子宫角和输卵管。利用逆向冲卵法，自子宫输卵管连接处插入注射针，伞部以平皿接着冲洗；

或在子宫输卵管连接处下1cm处，剪成V形小口，插入塑料细管，自伞部输卵管腹腔口插入，将液体推入，得到冲出的卵。;第45页，共106页。;第46页，共106页。;③从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞

可以用注射器插入卵泡中抽取，或在手术后暴露卵巢，以注射器自卵泡中取卵。

对人而言通常在超数排卵步骤处理后，用B超检测卵巢表面卵泡发育情况，然后，在腹腔后部体壁进行局部麻醉，将腹腔镜镜插管插入，以观察卵巢表面卵泡成熟情况，然后用套有聚四氟乙烯套管的吸卵针将卵吸出，放平皿中检查。

;（2）卵母细胞的选择

采集的卵母细胞绝大部分与卵丘细胞形成卵丘卵母细胞复合体（cumulusoocytecomplesxCOC）。无论采用何种方法，采集的COC都要求卵母细