分子生物学技术讲课文档.ppt

分子生物学技术;（优选）第二节分子生物学技术;二、PCR技术（聚合酶链式反应）;PCR反应中的主要成份

1.引物（两种寡核甘酸）

2.反应物（4种脱氧核苷酸）

3.DNA聚合酶（常用Taq聚合酶）

4.模板DNA

5.Mg2+（提供反应的离子条件）

6.反应缓冲液（提供反应的溶液体系）;PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法。

包括三个基本步骤:

(1)变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链;

(2)退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(40℃~60℃)下与模板上的目的序列通过氢键配对;

(3)延伸(Extension):在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度

下(72℃左右)，以目的DNA为模板进行合成。

由这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使

目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经30轮循环就可使DNA扩增出230个拷贝。;PCR循环–第一步–变性(94℃);PCR循环-第二步–退火(40℃-60℃);PCR循环-第三步–链延伸(72℃左右);第1个PCR循环完成后–

得到两个拷贝的靶序列;30次循环后靶序列扩增的数量;;PCR三步曲;;PCR仪的介绍;中学专用PCR仪与科研用仪器相比具有许多优点：

1.操作简便，实验直观

2.PCR原理完整展现

3.彩色大屏幕，中文菜单，便于学习加深理解

;琼脂糖凝胶电泳;三、琼脂糖凝胶电泳中缓冲液的含义及作用

电泳缓冲液：

载样缓冲液的作用：;电泳仪和电泳槽;DNA染色;DNA图谱观察仪;谢谢大家！