动物细胞培养基本技术与原理.pptxVIP

动物细胞培养基本技术与原理动物细胞培养是生物学中一项重要的研究技术,涉及细胞分离、培养基配制、无菌操作等多方面内容。掌握这些基本原理和技术,对于动物细胞生物学研究和细胞工程应用都有重要意义。AL作者：艾说捝

细胞培养基的组成无机盐细胞培养基中含有各种无机盐类,如钠盐、钾盐、钙盐、磷酸盐等,为细胞生长提供必需的无机营养。氨基酸细胞培养基中含有各种氨基酸,为细胞合成蛋白质和其他含氮化合物提供原料。维生素细胞培养基中添加各种维生素,可以促进细胞的正常代谢活动,维持细胞的生长与分裂。糖类细胞培养基中含有糖类,如葡萄糖、果糖等,作为细胞的能量来源。

细胞培养基的配制1原料配置根据培养基配方,精确称量各种营养成分,如氨基酸、维生素、葡萄糖等。遵循无菌操作原则,在无尘室环境中进行。2溶解混合将称量好的原料添加到适量的纯水中,使用磁力搅拌器缓慢搅拌至完全溶解。注意控制温度和pH值。3过滤灭菌采用0.22μm微孔滤膜对配制好的培养基进行无菌过滤,确保培养基无任何污染微生物。随后即可进行灭菌处理。

细胞培养基的灭菌1高压蒸汽灭菌在高温高压环境下杀灭细菌和真菌孢子2过滤灭菌采用0.22μm或0.45μm的膜过滤细菌和病毒3化学灭菌使用酒精、过氧化氢等化学试剂杀灭微生物细胞培养基的灭菌是确保细胞培养过程无微生物污染的关键步骤。通常采用高压蒸汽灭菌、过滤灭菌或化学灭菌等方法,根据培养基的成分和后续用途选择合适的灭菌方式。灭菌后的培养基需要及时使用或冷藏保存,以保证可用性和无菌性。

细胞培养基的储存温度控制细胞培养基应储存在4°C的低温环境中,以保持其组分的稳定性和活性。避光照培养基应避免暴露在强光下,因为光线可能会破坏某些敏感的成分。密封保存培养基应采用密封的容器保存,防止污染和蒸发。并尽量减少开盖次数。

细胞培养基的使用培养基配制根据细胞类型和实验需求,准备适当的细胞培养基。遵循无菌操作,小心避免污染。培养基保存培养基应在4℃冷藏保存,避免重复冻融。使用前检查pH值和营养成分是否符合要求。培养基添加根据细胞生长需求,适时补加培养基。如蛋白质、抗生素等营养成分,保持培养环境稳定。培养基更换定期更换新鲜培养基,及时补充营养,确保细胞持续生长繁衍。避免细胞代谢产物积累。

细胞培养基的pH值调整细胞培养基的pH值是细胞生长和代谢的关键因素。合适的pH值能够维持细胞的生理平衡,支持细胞的正常功能。通过添加酸性或碱性物质,可以调节培养基的pH值,确保pH值在最佳范围内。调节pH值时需要密切监控,避免对细胞造成不利影响。

细胞培养基的渗透压调整细胞培养基的渗透压是维持细胞生长和代谢的关键因素之一。合适的渗透压可以确保细胞膜的完整性,防止细胞脱水或溶胀。通过调整培养基的渗透压可以创造最佳的环境,确保细胞的健康生长。上图展示了几种常用的动物细胞培养基的渗透压范围,通常在280-320mOsm/kg之间。合理调整培养基的渗透压有助于优化细胞的生长环境。

细胞培养基的营养成分1碳水化合物提供细胞生长所需的主要能量来源,如葡萄糖、乳糖、半乳糖等。2氨基酸为细胞提供构建蛋白质的基本单位,如L-谷氨酸、L-精氨酸等。3维生素调节细胞代谢,促进细胞生长,如维生素B族、维生素C、维生素E等。4无机盐维持细胞电解质平衡和酸碱平衡,如氯化钠、硫酸镁、氯化钙等。

细胞培养基的缓冲系统pH缓冲系统细胞培养基中需要包含缓冲系统,能够维持适合细胞生长的pH值。常见的缓冲剂包括HEPES、PBS、Tris等,可根据不同细胞类型选择合适的缓冲体系。渗透压调节细胞培养基中还需要添加一些渗透压调节物质,如氯化钠、蔗糖等,维持培养基的渗透压在适合细胞生长的范围内。这样可以防止细胞因渗透压波动而受到损害。营养物质平衡培养基的缓冲系统还需要包括各种营养成分,如葡萄糖、氨基酸、维生素等,以满足细胞的生长代谢需求。这些营养物质的浓度和比例需要经过细致调整。

细胞培养基的抗生素抗生素的作用抗生素是细胞培养基中非常重要的组成部分。它们可以有效地抑制细菌和真菌的生长,确保细胞培养过程的无菌性和无污染性。常用抗生素种类常见的抗生素包括青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素等。不同种类的抗生素对不同类型的微生物有特异性的抑制作用。抗生素浓度调整细胞培养基中抗生素的浓度需要根据具体实验的要求进行调整。过高的浓度可能会对细胞本身产生毒性作用,而过低的浓度则无法有效杀灭污染菌。注意事项使用抗生素时需要注意细胞种类的敏感性,避免细胞毒性。部分细胞株对某些抗生素具有抗性,需要选择合适的种类和浓度。

细胞培养基的生长因子生长因子的作用生长因子是细胞培养基中的重要成分之一,它们能够促进细胞的增殖和分化,维持细胞的正常代谢活动。通过精准调控生长因子的浓度和种类,可以优化细胞培养基,提高细胞活性和增殖效率。常见生长因子表皮生长因子(EGF