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微生物检验样本处理办法

一、概述

微生物检验样本处理是确保检验结果准确性的关键环节。规范的样本处理流程可以有效减少污染、抑制杂菌生长、提高目标微生物的检出率。本指南旨在提供一套系统化的样本处理方法，涵盖样本采集、保存、运输、制备及前处理等关键步骤。

二、样本采集

（一）采样原则

1.选择合适的采样部位，确保能反映微生物分布情况。

2.使用无菌工具和容器，避免交叉污染。

3.根据样本类型（液体、固体、表面等）选择适配的采样方法。

（二）采样方法

1.**液体样本**：使用无菌吸管或注射器直接吸取，避免混入空气。

2.**固体样本**：采用无菌剪刀或铲刀取适量样品，置于无菌容器中。

3.**表面样本**：使用无菌棉签擦拭目标区域，或采用接触皿法取样。

（三）样本标识

1.标注样本名称、采集时间、采集人及储存条件。

2.使用防水标签，防止信息脱落。

三、样本保存与运输

（一）保存条件

1.液体样本：冷藏（2-8℃）保存，避免反复冻融。

2.固体样本：密封冷藏，防止水分蒸发。

3.厌氧样本：使用专用厌氧袋，置于厌氧罐中保存。

（二）运输要求

1.使用密封容器，防止泄漏。

2.冷藏运输时，确保保温箱温度稳定。

3.避免剧烈摇晃，减少样本降解风险。

四、样本制备

（一）前处理步骤

1.**液体样本**：

(1)离心：3000-5000rpm，5分钟，去除杂菌。

(2)取上清液或沉淀物，根据检验需求选择。

2.**固体样本**：

(1)研磨：使用无菌研钵将样本研磨成粉末。

(2)提取：加入无菌生理盐水或缓冲液，充分振荡混匀。

（二）纯化与浓缩

1.使用选择性培养基（如麦康凯琼脂）进行富集培养。

2.通过梯度离心或滤膜过滤（孔径0.22μm）去除大颗粒杂质。

五、前处理注意事项

（一）无菌操作

1.所有工具和容器需高压灭菌（121℃，15分钟）。

2.操作时佩戴口罩和手套，避免手部污染。

（二）避免过度处理

1.避免反复冻融，减少细胞损伤。

2.振荡时间不宜过长，防止样本成分破坏。

（三）质量控制

1.每批样本设置阳性对照和阴性对照。

2.定期检测培养基和工具的无菌状态。

六、特殊情况处理

（一）特殊样本

1.厌氧菌样本：立即使用厌氧袋，尽快培养。

2.病原体样本：采用低温速冻保存，避免RNA降解。

（二）污染排查

1.若发现杂菌生长，重新采集样本并改进处理流程。

2.记录污染情况，分析原因（如工具消毒不彻底）。

七、总结

规范的样本处理是微生物检验的基础。通过遵循科学的采集、保存、制备方法，可显著提高检验准确性和可靠性。操作人员需加强培训，确保每一步符合标准流程。

一、概述

微生物检验样本处理是确保检验结果准确性的关键环节。规范的样本处理流程可以有效减少污染、抑制杂菌生长、提高目标微生物的检出率。本指南旨在提供一套系统化的样本处理方法，涵盖样本采集、保存、运输、制备及前处理等关键步骤。

二、样本采集

（一）采样原则

1.选择合适的采样部位，确保能反映微生物分布情况。例如，皮肤采样时应选择无破损区域，呼吸道采样应避免口腔污染。

2.使用无菌工具和容器，避免交叉污染。所有采样工具（如拭子、注射器）必须经过高压灭菌（121℃，15分钟）。

3.根据样本类型（液体、固体、表面等）选择适配的采样方法。例如，液体样本宜使用无菌吸管，固体样本可使用无菌剪刀。

（二）采样方法

1.**液体样本**：

(1)直接吸取：使用无菌吸管或注射器直接从容器中吸取样本，避免混入空气。吸取量应根据检验需求确定，通常为1-5mL。

(2)穿刺采集：对于深层液体样本（如关节液），使用无菌注射器进行穿刺采集。

2.**固体样本**：

(1)切块法：使用无菌手术刀或剪刀取约5-10mg固体样本，置于无菌容器中。

(2)研磨法：对于组织样本，使用无菌研钵将样本研磨成粉末，然后加入无菌生理盐水（1:10比例）充分混匀。

3.**表面样本**：

(1)棉签擦拭法：使用无菌棉签在目标表面（如设备表面）擦拭3次，确保采集到足够微生物。

(2)接触皿法：将无菌琼脂皿轻轻接触表面，翻转后培养以获取表面微生物。

（三）样本标识

1.标注样本名称（如“皮肤样本”）、采集时间（精确到分钟）、采集人及储存条件（如“冷藏”）。

2.使用防水标签，并确保标签不易脱落。标签应包含唯一编号，便于追溯。

三、样本保存与运输

（一）保存条件

1.**液体样本**：冷藏（2-8℃）保存，避免反复冻融。某些特殊样本（如血培养）需立即送检，无法冷藏时使用专用保存液（如血培养瓶）。

2.**固体样本**：密封冷藏，防止水分蒸发。组织样本可加入无菌生理盐水或RNA保护剂保存。

3.**厌氧样本**：使用专用厌氧袋，置于