2025年HiTrapQ-HP-使用手册文档.pdfVIP

HiTrapQHP5ml的使用方法（举例子）

有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!!!柱子在仪器上时，无论何时均要限压!!!

Preparation

1.Buffer:

（pH根据蛋白的pI进行调整，pH尽量远离pI。pHpI,过Q柱；pHpI,过S柱）

A:50mMTris-HClpH8.0

B:50mMTris-HClpH8.01MNaCl

0.22um过滤除杂质，4℃静置过夜除气泡。

2.Protein:

用0.22um滤器过滤除杂质；或者分装于1.5mlEP管，14000rpm，4℃离心20min，去除

沉淀。

3.Prepareenoughtubes

Procedure

1打开仪器总开关，打开电脑。

检查：泵的探头是否放入纯水中。

洗泵：Manual--pump--pumpbasicwash--Aon,Bon--insert--execute

洗系统：Manual--pump--flow--10ml/min--insert--execute

Manual--other--Endtime--volume--40ml

2安装柱子

给流速：Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute(仪器显示系统压力为*Mpa)

限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute(0.3Mpa是HitrapQ

柱子的最大限压)

装柱子：先装上面，再装下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。

3清洗柱子

限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute

给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute（低流速下装柱子）

Manual--other--Endtime--volume--10ml

（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗1.5CV以上。CV：柱体积，

其中HitrapQHP5ml的CV为5ml）

停流速：End

装溶液：将A泵放入bufferA,将B泵放入bufferB。（必须在零流速下操作）

限压力：Manual--Alarms--Alarmspressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute

低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

清洗至基线走平（大约需要20ml）

高盐洗：Manual--pump--gradient--100%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

清洗至基线走平

低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

清洗至基线走平

停流速：End

4上样品

选择合适的上样环，例如5mlloop.

用纯水清洗loop三次，再用bufferA清洗loop三次，赶走气泡；同时清洗上样口。

将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入loop。（切忌吸入气泡）

5运行程序

File--设定的程序--showdetail--确认无误--START。

特别注意更改压力，上样量大小。

6清洗柱子（同3）

限压力（勿忘）--低盐洗--高盐洗--低盐洗

最后还要用水洗柱子。

停流速：End

装溶液：将A泵，B泵用水清洗后，放入纯水中。（必须在零流速下操作）

水洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute

Manual--pump--flow