2025年CRISPR英雄谱课件.pptVIP

TheHerosofCRISPR汇报人：周文慧组员：庄学梅，李海霞，周文慧，张姝，代泽宝，杨少娟指导教师：牛雪梅研究员

CONTENTS目录CRISPR/Cas9技术发展史及启发CRISPR/Cas9技术

20世纪50年代微生物遗传学、生物化学和基因组学，三位大师级科学家莱德伯格(JoshuaLederberg)、科恩伯格(ArthurKornberg)和桑格(FrederickSanger)为CRISPR的发现做出了奠基性贡献，使基因测序成为常规研究内容。技术发展史---CRISPR的发现莱德伯格奠定细菌遗传学基础，从而使简单的细菌成为分子生物学模式生物；科恩伯格奠定细菌分子生物学酶学基础，开创酶学研究科学范式；桑格于1977年发明基因测序方法；

技术发展史---CRISPR的发现FranciscoMojicaGilesVergnaudPhilippeHorvath发现聚集的规律插入间隔回文重复序列，并其命名为CRISPR，在20种微生物上发现了CRISPR基因位点，意识到CRISPR是一种适应性免疫系统纯粹好奇心无假设驱动个人兴趣在鼠疫杆菌样本中发现CRISPR基因位点，推测CRISPR基因位点是在执行防御机制检验CRISPR是一种适应性免疫系统这一假设，发现免疫功能就是依赖间隔与目标物之间的精准DNA序列匹配来实现的，研究了的两个cas基因的作用：cas7和cas9。军事上的特殊需要（防范生物战争）无假设驱动工业应用（提高酸奶产量）假设驱动

技术发展史---设计CRISPRJohnvanderOostLucianoMarraffiniSylvainMoineau鉴定拥有5个cas蛋白的复合体;Cascade，验证重复序列的回文结构特性导致crRNA中次级结构的形成，验证CRISPR的靶标不是RNA，是DNA验证CRISPR的目标是DNA,预测CRISPR可以被转而用于在异源性系统内进行基因组编辑。证明CRISPR的目标是DNA，发现Cas9的核酸酶活性是在精准的点位上对DNA进行切割的，而这些点位则由crRNA的特定序列编码假设驱动深厚的专业知识假设驱动深厚的专业知识实践运用

技术发展史---设计CRISPREmmanuelleCharpentier发现作反式作CRISPRRNA(tracrRNA)不仅仅涉及处理crRNA，它还对Cas9核酸酶复合体剪切DNA是必需的纯粹好奇心无假设驱动个人兴趣VirginijusSiksnys发现转入整个CRISPR基因位点就足以实现对质粒和噬菌体DNA的靶向干扰。用异源系统证明了Cas9是干扰活动唯一必需的蛋白，在试管里研究CRISPR与Charpentier合作证明两种RNA在被融合为单一的导向RNA（sgRNA）时也可以在体外发挥作用假设驱动个人兴趣JenniferDoudna纯粹好奇心无假设驱动个人兴趣

技术发展史---CRISPR-Cas9技术的发展与应用张峰人工核酸酶（TALEs）被解码之后，张峰成功地将TALEs改造用于哺乳动物，使得精准激活、抑制和编辑基因成为可能通过表达Cas9基因和一个设计过的靶向携带荧光素酶的质粒的CRISPRRNA，他可以在人胚胎肾细胞（HEK）内降低荧光度可利用多个sgRNA而实现多基因同时敲除，从而极大提升编辑效率和适用范围。发现一个由三部分组成的强有效的系统，包含来自化脓性链球菌和嗜热链球菌两者之一的Cas9、tracerRNA和CRISPR阵列纯粹好奇心无假设驱动深厚的专业知识

1987CRISPR的发现CRISPR广泛存在与原核生物中200020022005CRISPR的命名Cas基因的定义间隔序列适应性免疫系统确定PAM第一次证实CRISPR的作用：获得性免疫20072009201120082010201220132014Spacers转录形成crRNA指导Cas靶向性CRISPR靶点是DNATypeIII-BCRISPR能够对RNA切割Cas9蛋白由spacersequencos和cleaves引导识别靶序列进行切割造成DSBtracrRNA与crRNA形成二聚体并与Cas9组成复合体体外证实Cas能够对DNA切割第一次证实CRISPR可以用于哺乳动物的编辑证实编程CRISPR/Cas9蛋白复合物在序列特异性的靶位点识别并切割RNAtracrRNA(反式作用CRISPRRNA)crRNA(CRISPRRNA)PAM（ProtospacerAdjacentMotif）IshinoMojicaJansenPourcelMojicaBarrangouMarraffiniHaleBolotinJarneauCharpentierDou