2026版《课堂新坐标》高三生物学一轮复习江苏专版71选择性必修3第九单元第56讲重组DNA技术的基本工具.pptxVIP

;课标要求1．阐明重组DNA技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。

2．实验：DNA的粗提取与鉴定。;一、基因工程的概念;1．(人教版选择性必修3P68-69科技探索之路)基因工程的诞生和发展

(1)肺炎链球菌的转化实验不仅证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可在同种生物的不同个体之间转移。

(2)DNA双螺旋结构的提出和半保留复制的证明。

(3)中心法则的确立。

(4)遗传密码的破译。;(5)基因转移载体的发现。限制酶、DNA连接酶和逆转录酶的发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。

(6)DNA体外重组的实现。

(7)重组DNA表达实验的成功。

(8)DNA测序和合成技术的发明。

(9)PCR技术的发明。

(10)基因组编辑技术可以实现对特定基因的定点插入、敲除或替换。;二、重组DNA技术的基本工具

1．限制性内切核酸酶(也称“限制酶”);2．(人教版选择性必修3P71旁栏思考)存在于原核生物中的限制酶的作用是切割外源DNA以保证自身安全，防止外来病原体的危害。

3．(人教版选择性必修3P71正文)用两种不同的限制酶切割目的基因的优点是防止质粒和目的基因的自我环化及质粒和目的基因的反向连接。;2．DNA连接酶;3．载体;1．基因工程的原理是基因重组，此变异是不定向的。 ();1．限制性内切核酸酶EcoRⅠ只能识别序列-GAATTC-，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。;2．我国科学家将蓝细菌ictB蛋白(能高效转运和浓缩CO2)的基因(ictB基因)与水稻叶绿体基因组中PSbA基因的启动子(叶片特异性表达)连接成重组DNA，然后将重组DNA与Ti质粒构建成表达载体，再导入水稻叶肉细胞的叶绿体中，最终成功获得了转ictB基因水稻，提高了水稻的产量。在ictB基因表达载体的构建中，含PSbA启动子和ictB基因的重组DNA分子和Ti质粒的酶切位点如图所示。;(1)为使重组DNA分子能定向插入Ti质粒的相应区段中，可在重组DNA分子两端添加限制酶识别序列，据图可知，M端、N端添加的限制酶识别序列分别是________________。

(2)经过酶切的重组DNA分子和Ti质粒进行连接时，可选用________________(填“E．coliDNA???接酶”或“T4DNA连接酶”)。;[深化拓展]

限制酶的选择要求

1．位置要求：限制酶的酶切位点不能位于启动子、终止子、复制原点、标记基因当中，所选酶切位点应位于启动子和终止子之间，若载体有多个标记基因，并非都不能破坏，要至少保留一个，用于重组DNA的鉴定和筛选。另外，目的基因上如果有该酶的酶切位点，不能选择。;2．酶切要求

(1)单酶切：为使目的基因与载体形成的DNA片段末端能够连接，通常使用同一种限制酶将两者切割(如下图，选用XhoⅠ)，但单酶切会出现目的基因与质粒的自身环化和随意连接，还可造成目的基因的多拷贝插入。;(2)双酶切：双酶切可以确保目的基因的正确插入，要求两个酶切位点位于目的基因的两侧，如下图可选择PstⅠ和BamHⅠ，但也要注意酶切位点个数和相对位置，如：不能选择XhoⅠ和BamHⅠ进行双酶切。另外，不同的限制酶所产生的末端相同，两端也可连接，因MunⅠ和EcoRⅠ酶切后产生的末端相同，可选择XhoⅠ和MunⅠ酶切目的基因，用XhoⅠ和EcoRⅠ酶切质粒。;3．数量要求：如果所选限制酶的切割位点不止一个，如选择SmaⅠ进行酶切，则切割重组后会丢失复制原点，那么载体进入受体细胞后不能自主复制，所选限制酶在载体上最好只有一个酶切位点。

4．特殊要求：例如根据Ti质粒的T-DNA片段选择限制酶，假设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ，则甲、乙、丁质粒均不宜选取，丙质粒宜选取。;考向重组DNA技术的基本工具

1．(2024·南京市月考)基因工程中需使用多种工具酶，几种限制酶的切割位点如图所示。下列说法正确的是();A．限制酶SmaⅠ和EcoRⅤ切割形成的末端，不可以通过T4DNA连接酶相互连接

B．DNA连接酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶均可催化磷酸二酯键的形成

C．限制酶EcoRⅠ进行一次切割，会切断2个磷酸二酯键，形成1个游离的5′末端

D．若两种限制酶的识别序列相同，则形成的末端一定能通过DNA连接酶相互连接;B[限制酶EcoRⅠ和PstⅠ切割形成的是黏性末端，限制酶SmaⅠ和EcoRⅤ切割形成的是平末端，T4DNA连接酶可连接黏性末端和平末端，A错误。DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键；DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键；