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病理切片诊断操作流程

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目录

CATALOGUE

02

标本预处理

03

切片制作

04

染色与封片

05

显微镜诊断

06

报告与存档

01

标本接收

01

标本接收

PART

标本接收与登记

标准化接收流程

严格按照操作规范接收标本，核对患者信息、标本类型及数量，确保与申请单一致，避免混淆或遗漏。

01

电子化登记系统

采用信息化管理系统录入标本信息，包括唯一标识码、接收时间、送检科室等，确保数据可追溯且实时更新。

02

双人核对机制

由两名工作人员共同核对标本标签与申请单，签字确认，降低人为错误风险。

03

初步检查与标识

完整性评估

检查标本容器是否完好、密封性是否达标，评估标本是否因运输导致渗漏或损坏，记录异常情况并反馈。

病理学分类标识

根据标本性质（如组织、液体）进行分类标记，使用防水标签注明关键信息，避免后续处理环节混淆。

紧急标本优先处理

对需快速诊断的标本（如术中冰冻）加贴特殊标识，优先进入处理流程，缩短报告周期。

标本交接规范

交接记录存档

详细记录交接人员、时间及标本状态，保存纸质或电子交接单，确保责任可追溯。

冷链运输要求

对需低温保存的标本，交接时验证温度记录仪数据，确保运输过程符合生物样本保存标准。

异常情况处理协议

制定标本破损或信息不符的标准化处理流程，包括暂停处理、联系临床科室复核等步骤。

02

标本预处理

PART

标准化操作流程

遵循实验室固定操作规范，包括标本标识、密封容器、避免交叉污染等步骤，确保后续处理的可重复性。

选择合适的固定液

根据组织类型选择中性缓冲福尔马林或其他专用固定液，确保组织细胞结构完整性和抗原保存性，避免过度固定导致组织硬化或收缩。

固定时间与体积控制

固定液体积需为标本体积的10倍以上，确保充分渗透；固定时间依据组织厚度调整，通常需保证均匀渗透至核心区域。

固定操作流程

脱水与透明步骤

梯度酒精脱水

依次采用低浓度至高浓度酒精（如70%、80%、95%、100%）逐步置换组织水分，每级停留时间需精确控制以避免组织过度收缩或变形。

自动化设备应用

推荐使用全封闭脱水机完成流程，减少人为误差并提升处理效率，同时降低试剂挥发对操作人员的危害。

透明剂处理

使用二甲苯或环保替代品置换酒精，使组织透明化便于石蜡渗透；需监测透明剂纯度及更换频率，避免残留影响切片质量。

将脱水透明后的组织置于熔融石蜡中，温度严格维持在略高于石蜡熔点（如58-60℃），确保充分渗透且不破坏组织结构。

石蜡浸渍与温度控制

包埋时需根据切片需求调整组织摆放方向（如纵切或横切），并在模具上标注标本编号，避免混淆。

模具定向与标识

包埋后立即移至冷台或冰面加速石蜡凝固，形成均匀块状，便于后续切片机夹持和连续切片。

快速冷却定型

包埋技术要点

03

切片制作

PART

切片机操作标准

设备校准与维护

定期检查切片机刀片锋利度、轨道润滑度及机械稳定性，确保切片过程中无振动或偏移，避免组织样本损伤。

操作环境控制

保持恒温恒湿环境（建议温度20-25℃，湿度40-60%），减少样本因环境变化导致的脱水或变形。

标准化操作流程

严格遵循开机自检、样本固定、刀片角度调整（通常为5-10°）及废屑清理步骤，确保切片一致性。

切片厚度控制

微米级精度调节

根据组织类型（如脂肪组织4-6μm、致密组织2-3μm）调整切片厚度，使用高精度厚度调节旋钮并配合显微镜实时监测。

防卷曲技术应用

通过显微测微尺或数字图像分析软件测量切片实际厚度，确保与设定值误差不超过±0.5μm。

采用防卷板或低温冷冻辅助技术，避免薄切片（3μm）因张力不均导致的卷曲或撕裂。

厚度验证方法

切片质量评估

完整性检查

切片需完整覆盖目标区域，无缺口、折叠或污染，边缘整齐且无刀痕残留。

染色适配性测试

通过预染色（如HE染色）评估切片对染液的渗透性，确保细胞核与胞质对比清晰、无脱片现象。

镜下结构辨识

高倍镜下观察细胞形态、组织结构及染色均匀性，排除人为假象（如挤压、气泡或干燥裂纹）。

04

染色与封片

PART

染色剂选择方法

根据组织类型选择染色剂

不同组织需匹配特异性染色剂，如苏木精-伊红（HE）适用于常规病理检查，特殊染色（如Masson三色染色）用于区分胶原纤维与肌纤维。

考虑染色目的与对比度

需明确染色目标（如细胞核、胞质或特定蛋白），高对比度染色剂可增强显微观察的清晰度，如DAPI用于荧光标记细胞核。

评估染色剂稳定性与兼容性

优先选择化学性质稳定的染色剂，避免与固定剂或脱水剂发生反应，确保染色结果可重复。

切片需经二甲苯脱蜡及梯度酒精复水，确保组织充分暴露于水溶性染色剂，避免假阴性结果。

染色步骤执行

脱蜡与复水处理

染色时间过长易导致背景过深，温度波动可能影响染色均匀性，建议在恒温环境下操作。

严格控制染色时间与