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2025年病毒学科流感病毒抗体检测操作规范考试及答案解析

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.流感病毒抗体检测中，血清样本采集的最佳时间为（）

A.发病后1-3天

B.发病后5-7天

C.发病后10-14天

D.发病后21天以上

答案：B

解析：流感病毒特异性抗体在感染后5-7天开始产生，此时采集血清可有效检测到IgM抗体；发病初期（1-3天）抗体未形成，后期（10天以上）IgG抗体占主导，可能影响急性期与恢复期双份血清的对比分析。

2.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测流感抗体时，洗涤步骤中每孔加洗涤液的体积应为（）

A.50μL

B.100μL

C.200μL

D.300μL

答案：C

解析：ELISA洗涤需确保覆盖整个孔底并充分稀释残留液体，常规操作中每孔加200μL洗涤液，浸泡30秒后弃去，重复3-5次，可有效减少非特异性结合。

3.化学发光法检测流感抗体时，样本溶血对结果的影响主要表现为（）

A.无影响

B.假阳性

C.假阴性

D.结果波动无规律

答案：B

解析：溶血样本中的血红蛋白可能与发光底物发生非特异性反应，或干扰抗原抗体结合位点，导致检测信号增强，出现假阳性结果。

4.流感抗体检测室内质控应至少使用（）

A.弱阳性和强阳性质控品

B.阴性和阳性质控品

C.高值和低值质控品

D.空白对照和临界值质控品

答案：B

解析：室内质控需同时监控阴性和阳性结果的准确性，阴性质控品用于验证非特异性反应，阳性质控品用于验证检测系统的灵敏度和特异性，两者缺一不可。

5.血清样本分离后若不能立即检测，4℃保存时间不超过（）

A.12小时

B.24小时

C.48小时

D.72小时

答案：C

解析：血清中抗体在4℃下稳定性较好，但超过48小时可能因蛋白酶活性增加导致抗体降解，尤其IgM抗体对温度更敏感，长期保存需-20℃冻存。

二、判断题（每题2分，共20分）

1.咽拭子样本可用于流感病毒抗体检测。（）

答案：×

解析：抗体检测需检测血液中的特异性免疫球蛋白（IgM/IgG），咽拭子主要用于病毒核酸或抗原检测，无法反映体内抗体水平。

2.ELISA检测时，试剂从2-8℃取出后可直接使用。（）

答案：×

解析：低温保存的试剂需在室温（20-25℃）平衡30分钟以上，避免温度差异导致的结露或反应速率异常，影响检测准确性。

3.洗板机洗涤后，需用吸水纸拍干孔内残留液体。（）

答案：√

解析：残留洗涤液可能稀释后续加入的酶结合物或底物，导致信号减弱；拍干时需避免孔间交叉污染，应使用干净吸水纸轻压孔板底部。

4.化学发光仪检测时，样本加样量误差5%对结果无影响。（）

答案：×

解析：化学发光法对加样量敏感，误差超过2%可能导致信号强度偏离线性范围，需使用校准后的移液器，加样量变异系数（CV）应≤5%。

5.流感抗体检测结果为“阴性”可完全排除流感病毒感染。（）

答案：×

解析：阴性结果可能因采样时间过早（抗体未产生）、免疫功能低下（抗体水平不足）或检测方法灵敏度限制导致，需结合临床症状和其他检测（如核酸检测）综合判断。

三、简答题（每题8分，共40分）

1.简述流感病毒抗体检测中血清样本采集的操作要点。

答案：①采集时间：急性期（发病5-7天）和恢复期（发病2-4周）双份血清，间隔10-14天，恢复期抗体滴度≥4倍升高有诊断意义；②采集方式：静脉采血3-5mL，使用无抗凝剂真空采血管；③分离血清：采血后室温静置30-60分钟待血液凝固，3000rpm离心10分钟，避免溶血或脂血；④标识记录：标注患者姓名、采样时间、样本类型（急性期/恢复期），避免混淆。

2.列举ELISA法检测流感抗体的主要步骤及关键质控点。

答案：步骤：包被（抗原固定于固相载体）→封闭（阻断非特异性结合位点）→加样（待测血清+阴性/阳性对照）→温育（抗原抗体结合）→洗涤（去除未结合物质）→加酶结合物（抗人IgG/IgM酶标抗体）→温育→洗涤→加底物（显色反应）→终止→读数。关键质控点：包被抗原浓度（需预实验优化）、封闭液选择（常用牛血清白蛋白）、温育时间与温度（37℃30-60分钟或4℃过夜）、洗涤次数（≥3次）、底物显色时间（避免过久导致本底升高）。

3.比较胶体金法与化学发光法检测流感抗体的优缺点。

答案：胶体金法：优点-操作简便（15-20分钟出结果）、无需仪器、适合现场快速检测；缺点-灵敏度较低（约80-90%）