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再生医学qPCR检测技术员岗位考试试卷及答案

单项选择题（每题2分，共10题）

1.qPCR反应体系中，Taq酶的主要作用是（）

A.识别引物B.催化DNA合成C.解链DNAD.标记DNA

答案：B

2.以下哪种物质不是qPCR反应必需的（）

A.dNTPB.引物C.模板D.限制性内切酶

答案：D

3.qPCR实验中，CT值的含义是（）

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.反应结束的循环数

C.引物结合的循环数

D.模板扩增的循环数

答案：A

4.提取RNA时，常用的试剂是（）

A.乙醇B.氯仿C.苯酚D.以上都是

答案：D

5.引物设计的原则不包括（）

A.长度适宜B.避免互补C.富含GCD.特异性强

答案：C

6.qPCR实验中，阴性对照的作用是（）

A.检测实验是否有污染

B.确定模板浓度

C.评估引物效率

D.验证实验准确性

答案：A

7.逆转录的模板是（）

A.DNAB.RNAC.蛋白质D.多糖

答案：B

8.以下哪种因素可能影响qPCR结果的准确性（）

A.模板质量B.引物浓度C.反应温度D.以上都是

答案：D

9.荧光定量PCR技术基于的原理是（）

A.碱基互补配对B.核酸杂交C.荧光信号检测D.以上都是

答案：D

10.qPCR实验中，标准曲线的作用是（）

A.检测引物特异性

B.评估实验重复性

C.定量模板浓度

D.确定反应最适条件

答案：C

多项选择题（每题2分，共10题）

1.qPCR实验所需的仪器有（）

A.荧光定量PCR仪B.离心机C.移液器D.天平

答案：ABC

2.影响RNA提取质量的因素有（）

A.样品新鲜度B.提取方法C.保存条件D.操作人员技术

答案：ABCD

3.设计qPCR引物时应考虑的因素包括（）

A.引物长度B.引物Tm值C.引物特异性D.引物二聚体

答案：ABCD

4.以下属于qPCR反应体系成分的有（）

A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP

答案：ABCD

5.荧光定量PCR的荧光标记方法有（）

A.探针法B.SYBRGreen法C.同位素标记法D.化学发光法

答案：AB

6.qPCR实验中，可能出现的问题有（）

A.扩增曲线异常B.CT值不稳定C.无扩增产物D.引物二聚体

答案：ABCD

7.逆转录过程需要的试剂有（）

A.逆转录酶B.dNTPC.引物D.缓冲液

答案：ABCD

8.提高qPCR实验准确性的措施包括（）

A.优化反应条件B.进行多次重复实验C.严格控制实验环境D.定期校准仪器

答案：ABCD

9.用于RNA提取的样本类型有（）

A.细胞B.组织C.血液D.尿液

答案：ABC

10.qPCR技术可应用于（）

A.基因表达分析B.病原体检测C.基因突变检测D.药物研发

答案：ABCD

判断题（每题2分，共10题）

1.qPCR实验中，模板浓度越高，CT值越大。（×）

2.引物的Tm值越高，其与模板的结合越稳定。（√）

3.RNA提取过程中，可在高温下长时间操作。（×）

4.SYBRGreen法检测qPCR结果时，特异性高于探针法。（×）

5.逆转录反应不需要引物。（×）

6.qPCR实验中，阳性对照可以不设置。（×）

7.提取的RNA可直接用于qPCR反应。（×）

8.反应体系中dNTP浓度过高会影响qPCR结果。（√）

9.荧光定量PCR仪可以同时检测多个样本。（√）

10.设计引物时，引物的GC含量应尽量高。（×）

简答题（每题5分，共4题）

1.简述qPCR实验的基本原理。

答案：qPCR基于DNA半保留复制原理。在反应体系中加入模板、引物、Taq酶、dNTP等，通过不同温度循环，使模板变性、引物退火、延伸。利用荧光信号检测，随着PCR循环进行，产物增多，荧光信号增强，通过检测荧光信号达到设定阈值时的循环数（CT值），实现对模板核酸的定量分析。

2.提取RNA时，如何保证RNA的质量？

答案：首先确保样品新鲜，取材后尽快处理。选择合适的提取方法和优质试剂盒。操作过程中严格遵循无菌、无RNase环境，使用无RNase的耗材和试剂。提取后及时检测浓度和纯度，保存时用合适缓冲液，低温保存，避免反复冻融，防止RNA降解。

3.简述qPCR实验中标准曲线的制作过程。

答案：先准备已知浓度梯度的标准模板，将其加入qPCR反应体系，进行扩增。反应结束后，以标准模板浓度的对数值为横坐标，对应的CT值为纵坐标，利用软件绘制标准曲线。理想的标准曲线应具有良好线性关系，斜率在合理范围，可用于未知样本的定量分析。

4.分析qPCR实验中无扩增产物的可能原因。

答案：可能原因有：模板问题，如模板质量差、浓度过低或被污染；引物设计不合理，如特异性不强、与模板结合不佳；反应条件不合适，像退火温度过高或过低、循环数不足；试剂问题，如Taq酶失活、dNTP降解；仪器故障，如温