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高致病性PRRSV广东云浮株的分离鉴定与遗传背景分析

一、引言

（一）PRRSV研究背景与意义

猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS），俗称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirus，PRRSV）引发的一种对全球养猪业危害极大的病毒性传染病。自1987年在美国北卡罗来纳州首次被发现以来，PRRSV便迅速在全球范围内传播扩散，给各国养猪业带来了沉重的打击。

PRRSV是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，归属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，其基因组全长约15kb，包含9个开放阅读框（ORFs）。依据遗传差异和抗原特性，PRRSV主要分为欧洲型（PRRSV-1）和美洲型（PRRSV-2），二者全基因组核苷酸相似性仅为50%-70%。在中国，主要流行的是美洲型PRRSV。该病毒主要侵袭猪的生殖系统和呼吸系统，致使妊娠母猪出现流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍问题，以及各年龄段猪出现呼吸困难、败血症、高死亡率等呼吸道症状，尤其是1月龄以内的仔猪最为易感，发病率和死亡率可高达80%-100%。

2006年，我国多个省份的猪场突发“猪高热综合征”，疫情迅速蔓延至全国20多个省市自治区。经我国学者研究证实，此次疫情的主要病原是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）。与2005年以前流行的经典PRRSV毒株相比，HP-PRRSV致病性更强，不仅能使仔猪发病，成年猪也难以幸免；病程更短，通常为5-20天，病猪常常在数天内死亡，死亡率极高。遗传进化分析显示，高致病PRRSV的NSP2蛋白在482位、533位-561位存在特异的共30个氨基酸缺失，这一特征成为区分高致病性毒株和经典流行毒株的特异性标记。此次疫情给我国养猪业造成了前所未有的巨大经济损失，严重威胁了我国养猪业的健康发展。

广东省作为我国生猪养殖与流通的核心区域之一，养猪业在其农业经济中占据着重要地位。然而，PRRSV的频繁流行给广东省的养猪业带来了严重的经济损失。据相关数据统计，广东省每年因PRRSV感染导致的直接经济损失高达数亿元，间接损失更是难以估量，包括生猪生产性能下降、药物和疫苗费用增加、养殖成本上升等。因此，深入了解广东省PRRSV的流行毒株变异特征，对于制定科学有效的疫病防控策略，保障广东省乃至全国养猪业的健康稳定发展具有至关重要的意义。

（二）广东云浮株的研究价值

近年来，在广东云浮地区分离到了一株具有独特NSP2基因缺失特征的高致病性PRRSV毒株。该毒株的NSP2基因缺失情况既与经典株存在一定关联，又展现出新型变异特征，在遗传背景上呈现出独特性。通过对该毒株的深入研究，有望揭示华南地区PRRSV的进化路径。了解病毒是如何在当地环境中演变的，包括其从经典毒株到新型变异毒株的转变过程，以及与其他地区毒株的遗传关系，这对于掌握病毒的进化规律、预测其未来的变异趋势具有重要价值。

此外，对广东云浮株致病机制的研究，有助于深入了解PRRSV的致病过程，明确病毒与宿主之间的相互作用关系。这将为开发更有效的防控措施，如新型疫苗和诊断方法，提供坚实的理论基础。通过解析该毒株的遗传背景和致病机制，能够为华南地区乃至全国的PRRSV防控工作提供关键的科学依据，助力养猪业抵御这一疫病的威胁。

二、材料与方法

（一）病料采集与病毒分离

在广东云浮地区的规模化猪场，针对出现高热、呼吸困难及繁殖障碍等典型症状的病猪展开样本采集工作。采集的样本包括病猪的肺脏、脾脏以及血清。这些样本是病毒研究的关键材料，因为病猪的这些组织和体液中极有可能含有高致病性PRRSV。

采集后的样本被迅速送往实验室进行处理。首先，对肺脏和脾脏组织进行研磨，将其制成匀浆。这一步骤的目的是使组织中的病毒充分释放出来，以便后续的接种操作。匀浆过程中，需严格遵循无菌操作原则，避免样本受到其他微生物的污染。接着，将制备好的匀浆进行离心处理，去除组织碎片和杂质，获取含有病毒的上清液。对于血清样本，则可直接用于后续实验。

将处理后的样本接种到Marc-145细胞上。Marc-145细胞是一种常用于PRRSV分离和培养的细胞系，它对PRRSV具有较高的敏感性。接种后，将细胞置于适宜的培养条件下进行培养，通常是在37℃、5%CO?的培养箱中。在培养过程中，密切观察细胞病变（CPE）情况。PRRSV感染Marc-145细胞后，会导致细胞出现一系列典型的病变特征，如细胞变圆、皱缩、脱落等。这些病变特征是判断病毒