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常规病理切片制作全流程技术规范与质量控制

病理切片制作是病理诊断的核心环节，其质量直接影响临床诊断的准确性。作为病理科技术人员，需严格遵循标准化操作流程，从标本接收到切片染色全流程实施质量控制。本文系统梳理常规石蜡切片、快速石蜡切片及冰冻切片的制作规范，结合最新行业标准与技术创新，为技术人员提供可操作性指南。

一、取材：病理诊断的源头控制

（一）标本接收与登记

信息核对系统

采用电子标本管理系统（LIS）实现全程追溯，核对送检单与标本容器信息（患者姓名、住院号、标本部位），确保标本唯一性标识。对于多部位标本，需使用独立容器并标注解剖位置。

标本状态评估

肉眼观察标本完整性，记录碎裂、污染情况，对含钙化组织需进行X线定位。

测量标本三维径线，评估固定液量（应≥标本体积的5倍），不足时立即补充10%中性缓冲福尔马林。

特殊标本处理：骨组织需锯取薄片（≤0.3cm）后脱钙；脂肪组织采用梯度酒精脱水（70%→85%→95%→无水乙醇），每步延长30分钟。

（二）取材操作规范

工具选择与校准

使用一次性15号或22号取材刀片，配合无齿镊（避免挤压组织）。电子称量系统精度需达0.01g，确保取材重量准确性。

取材原则

肿瘤标本：取肿瘤中心、边缘及正常组织交界区（各0.5cm3），记录肿瘤大小、浸润深度。

淋巴结：分离皮质与髓质，直径≤0.3cm者整体取材，＞0.3cm者按0.3cm间隔切片。

胃肠道标本：展示黏膜层、肌层及浆膜层，取材间距≤0.5cm，记录病变范围及溃疡特征。

特殊组织处理

含液体成分标本（如囊肿）：先吸除液体，再取囊壁组织。

感染性标本：在生物安全柜内操作，使用含氯消毒剂（1000mg/L）擦拭台面。

（三）标本处理与保存

固定液选择

常规标本：10%中性缓冲福尔马林（pH7.2-7.4）。

神经组织：4%多聚甲醛（含0.1MPBS，4℃保存）。

免疫组化标本：4%多聚甲醛（固定时间≤24小时）。

固定参数控制

温度：25℃±2℃，避免高温导致蛋白变性。

时间：小标本6小时，大标本24小时，定期检测固定液pH值。

体积比：组织:固定液=1:10，不足时补充新鲜固定液。

剩余标本处理

标记取材部位后4℃冷藏保存，保存期限30天（司法鉴定标本需长期保存）。

含骨组织标本：脱钙后保存于70%乙醇中。

（四）环境安全与生物防护

个人防护装备（PPE）

配备N95口罩、防渗透隔离衣、双层手套（外层丁腈手套），操作含HIV/HBV标本时加戴面屏。

生物安全控制

取材台配备负压抽吸系统（风速≥0.5m/s），定期检测空气微生物浓度。

医疗废物分类处理：锐器盒存放针头、刀片；感染性废物袋存放含组织标本的敷料。

环境保护措施

福尔马林废液收集后交由专业机构处理，禁止直接排放。

使用柠檬烯基环保透明剂替代二甲苯，减少挥发性有机物（VOCs）排放。

二、组织处理：从新鲜组织到石蜡块

（一）固定后处理

水洗流程

流水冲洗（30分钟）去除固定液残留，蒸馏水漂洗（3次×5分钟）减少杂质。含重金属标本（如银染组织）需用EDTA溶液（pH8.0）螯合处理。

（二）脱水透明标准化

梯度酒精脱水

70%乙醇（过夜）→85%乙醇（2小时）→95%乙醇（1.5小时×2次）→无水乙醇（1小时×3次）。大标本需延长每步时间20%。

透明剂置换

二甲苯Ⅰ（45分钟）→二甲苯Ⅱ（30分钟），定期检测二甲苯含水量（应＜0.5%），使用无水硫酸钠干燥。

（三）浸蜡与包埋

浸蜡参数

软蜡（52-54℃）浸渍1小时，硬蜡（56-58℃）浸渍2小时。

真空浸蜡系统（压力-0.08MPa）可减少气泡，提高浸蜡均匀性。

包埋技术要点

定向包埋：皮肤组织表皮面朝下，肠管黏膜面朝上。

冷台温度设置：-20℃快速凝固（急诊标本）或4℃缓慢凝固（精细结构）。

包埋盒标识：二维码标签含患者信息、取材部位及唯一标识码。

（四）切片与展片

石蜡切片

刀片角度：5°-10°，切片厚度4-5μm（常规组织），2-3μm（细胞学标本）。

切片机校准：每月检测切片厚度均匀性（变异系数CV≤5%）。

展片技术

水浴温度：42℃±1℃，展片时间30-60秒至无褶皱。

捞片角度：45°斜向捞取，避免气泡产生。

（五）拷片与脱蜡

拷片条件

烤片机温度：65℃±2℃，烤片时间2小时，使切片紧贴载玻片。

脱蜡流程

二甲苯Ⅰ（10分钟）→二甲苯Ⅱ（5分钟）→无水乙醇（5分钟×2次）→95%乙醇（3分钟）→85%乙醇（2分钟）→蒸馏水（1分钟）。

三、染色：形态与功能的视觉转化

（一）HE染色原理

核质区分机制

苏木精（碱性染料）与核酸结合显蓝色，伊红（酸性染料）与蛋白质结合显红色。

染色反应动力学：苏木精氧化态（氧化苏木精）染色力强，伊红醇溶性（伊红Y）渗透性好。

（二）标准化染色步骤

苏木精染色