酶法制备富血红素多肽的工艺优化与特性解析.docxVIP

酶法制备富血红素多肽的工艺优化与特性解析

一、引言

（一）研究背景与意义

在全球范围内，缺铁性贫血已然成为主要的营养缺乏病之一，严重威胁着人类的健康。据世界卫生组织数据显示，全球约有20亿人受贫血影响，其中缺铁性贫血占比颇高。在中国，孕妇、儿童等群体的缺铁性贫血患病率也不容小觑。传统的补铁剂多以非血红素铁为主，这类铁剂在人体内的生物利用率较低，平均吸收率仅在5%-25%之间。并且，服用后常常伴随着明显的副作用，如胃肠道不适，包括恶心、呕吐、便秘或腹泻等，还可能影响其他营养素的吸收。

血红素铁作为一种生物态铁，在补铁领域展现出独特的优势。它能够直接被人体肠粘膜吸收，生物利用率显著高于非血红素铁，达到其2-3倍，且不会产生诸如传统补铁剂导致的胃肠道不适等毒副作用，可作为营养强化剂广泛应用于化工、医药和食品行业。在食品领域，血红素铁可用于开发功能性食品，如铁强化奶粉、铁强化饼干等，满足特定人群的补铁需求；在医药行业，以血红素铁为主要成分的补铁制剂，能够更有效地治疗缺铁性贫血。

动物血液中富含血红蛋白，其占血液总蛋白质含量的60％-70％，是制备血红素铁的优质原料。利用酶解技术从动物血红蛋白中制备富血红素多肽，既能实现畜禽血液资源的高效利用，减少资源浪费和环境污染，又能避免传统有机溶剂提取法中存在的有机溶剂残留对人体健康的潜在风险，具有显著的经济和社会效益。通过酶解工艺得到的富血红素多肽，不仅保留了血红素铁的高生物利用率，多肽本身还可能具有其他生物活性，如抗氧化、抗菌等，进一步拓展了其应用价值。所以，深入研究富血红素多肽的制备及其特性，对于开发高效、安全的功能性补铁制剂，改善缺铁性贫血现状具有重要的现实意义。

（二）国内外研究现状

目前，国内外针对富血红素多肽的研究主要聚焦于复合酶水解工艺的优化。国内研究中，有学者利用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶组成的复合酶对猪血红蛋白进行水解。通过正交试验，系统考察了底物质量分数、加酶比例、水解pH值和水解温度等因素对水解率、蛋白质回收率、血红素含量等指标的影响，最终确定了最佳工艺参数为底物质量分数6%、pH8、水解温度55℃、加酶比例5:5（木瓜蛋白酶：中性蛋白酶），在此条件下，猪血红蛋白水解产物具备较高的蛋白质回收率和血红素含量。

国外研究人员在牛血红蛋白的酶解研究中取得进展，采用两步酶解的方法，先使用风味蛋白酶进行初步水解，再利用碱性蛋白酶进一步酶解。该方法在降低水解产物苦味值方面效果显著，同时提高了多肽的得率和血红素的保留率。但研究也指出，不同来源的血红蛋白由于其分子结构和氨基酸组成的差异，对酶解工艺的响应存在较大不同，目前尚缺乏一种普适性的工艺能够高效地从各种原料血红蛋白中制备富血红素多肽。在多肽-血红素结合机制方面，虽然已经明确多肽对血红素具有一定的稳定和增溶作用，但具体的结合方式、作用力类型以及结构与功能的关系等仍有待深入研究。

二、富血红素多肽制备工艺研究

（一）原材料选择与预处理

1.血红蛋白来源筛选

在富血红素多肽的制备过程中，原材料的选择对最终产品的质量和性能起着关键作用。经过大量的研究和实践验证，猪血红蛋白与牛血红蛋白被优选为制备富血红素多肽的原料。猪血红蛋白和牛血红蛋白在动物血液中含量丰富，均富含血红素，其含量占全血蛋白的60%-70%，这为高效制备富血红素多肽提供了充足的物质基础。同时，二者来源广泛，在肉类加工行业，猪和牛的屠宰量较大，血液资源丰富，易于获取，能够满足大规模生产的需求，降低生产成本。

研究数据表明，猪血红蛋白水解产物具有较高的血红素含量，可达2.9%。在相关实验中，通过对猪血红蛋白进行特定的酶解处理，得到的水解产物经过精确检测，其血红素含量稳定在这一水平，这使得猪血红蛋白成为制备富血红素多肽的优质选择之一。牛血红蛋白在经过破壁处理后，展现出更高的血红素释放率。采用先进的破壁技术，如高压均质破壁、超声破壁等，能够有效打破牛红细胞的细胞膜，使血红蛋白充分暴露，从而显著提高血红素的释放率。较高的血红素释放率意味着在后续的制备工艺中，可以获得更多的血红素用于多肽的结合，有利于提高富血红素多肽的产量和质量，适合规模化生产。

2.原料预处理技术

为了确保酶解反应的高效进行，提高富血红素多肽的制备质量，对原料进行预处理至关重要。在对牛血进行处理时，采用高压均质机破碎红细胞是一种有效的方法。高压均质机利用高压环境下的高速剪切力，能够迅速且均匀地破碎牛红细胞，使血红蛋白释放出来。在操作过程中，将采集到的新鲜牛血加入适量的抗凝剂，如柠檬酸钠，以防止血液凝固。然后将其置于高压均质机中，设置合适的压力和均质次数，一般压力控制在50-100MPa，均质次数为2-3次，可使红细胞破碎率达到90%以上。经过高压均质破