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动物源沙门氏菌耐药性特征及耐药基因分布解析
一、引言
(一)研究背景与意义
沙门氏菌作为一种广泛存在于自然界的革兰氏阴性杆菌,是重要的人畜共患病原体。它能感染多种动物,引发如仔猪副伤寒、鸡白痢等疾病,给畜牧业带来严重的经济损失。更为严峻的是,动物源沙门氏菌可通过食物链传播至人类,引发食物中毒、胃肠炎甚至败血症等,严重威胁人类健康。
随着抗生素在畜牧业中的广泛使用,沙门氏菌的耐药性问题日益突出。耐药菌株的出现使得传统抗生素治疗效果大打折扣,不仅增加了治疗成本,还延长了病程,加剧了感染的传播风险。多重耐药沙门氏菌的出现,更是让临床治疗面临巨大挑战,使得原本可治的感染变得棘手。例如,一些地区的沙门氏菌对常用的四环素类、磺胺类药物耐药率极高,部分菌株甚至对氟喹诺酮类、氨基糖苷类等药物也产生了耐药性。
不同动物源的沙门氏菌,其耐药性特征和耐药基因携带情况存在差异。解析这些差异,明确耐药性的分子机制和传播规律,对于临床精准用药至关重要。只有准确了解沙门氏菌的耐药特点,才能针对性地选择有效的治疗药物,避免盲目用药导致的耐药性进一步扩散。同时,这也有助于建立完善的耐药性监测体系,及时掌握沙门氏菌耐药性的动态变化,为制定科学合理的防控策略提供依据,从而有效保障畜牧业的健康发展和公共卫生安全。
(二)国内外研究现状
近年来,国内外学者针对动物源沙门氏菌的耐药性开展了大量研究。在新疆焉耆地区,宋强强等人在2025年的研究中发现,牛、鸡、猪、羊等动物源沙门氏菌的多药耐药现象普遍存在,且耐药基因分布呈现出宿主特异性。其中,猪源沙门氏菌对四环素类、磺胺类药物的耐药率相对较高,这可能与该地区养猪业中这两类药物的使用频率有关。而宠物犬源沙门氏菌的研究也有新进展,轩慧勇等人在2019年的研究显示,宠物犬源菌株呈现出多重耐药趋势,对多种常用抗菌药物耐药,这可能与人与宠物犬的密切接触以及宠物医疗中抗菌药物的不合理使用有关。
在国外,一些发达国家对动物源沙门氏菌的耐药性监测体系较为完善。美国通过长期的监测,积累了丰富的猪源沙门氏菌耐药性数据,发现其耐药菌株比例逐渐上升,多重耐药现象愈发普遍。欧洲国家则利用先进的分子分型技术,如脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)等,深入研究沙门氏菌的传播途径和遗传进化关系,为防控措施的制定提供了有力支持。
尽管已有众多研究,但不同动物源沙门氏菌耐药性差异的分子机制及传播规律仍有待深入探究。例如,目前对于某些耐药基因在不同宿主间的传播方式和驱动因素尚不清楚,这限制了我们从根本上解决沙门氏菌耐药性问题。未来的研究需要进一步整合多学科技术,从分子、细胞和群体水平全面解析沙门氏菌的耐药机制和传播规律,为开发更有效的防控策略奠定基础。
二、材料与方法
(一)样本采集与菌株分离
样本来源:本研究广泛收集了多种动物源样本,以全面了解沙门氏菌的分布与耐药情况。在新疆焉耆地区,精心采集了牛源样本300份,这些样本来自当地多个规模化牛场及散养户,涵盖了不同年龄、品种的牛。同时,还采集了鸡源样本200份,涉及蛋鸡、肉鸡养殖场,确保样本的多样性。猪源样本150份,均来自当地具有代表性的养猪场,以及羊源样本120份,涵盖绵羊、山羊等不同品种,为研究羊源沙门氏菌提供了丰富的数据基础。此外,为探究宠物与人类健康的潜在联系,还采集了宠物犬粪便样本80份,这些样本来自宠物医院、宠物美容院及宠物家庭,反映了宠物犬的健康状况。
分离鉴定:为准确分离沙门氏菌,采用了选择性培养基SS琼脂进行初次筛选。将采集的粪便或肠道内容物样本,按照无菌操作原则,接种于SS琼脂平板上,置于37℃恒温培养箱中培养24小时。在此过程中,沙门氏菌在SS琼脂平板上会形成具有典型特征的菌落,如圆形、湿润、半透明,边缘整齐,部分菌落中心可能呈黑色。挑取这些可疑菌落,进行进一步的生化鉴定。利用三糖铁(TSI)琼脂、赖氨酸脱羧酶试验等生化反应,初步确定其是否为沙门氏菌。同时,为确保鉴定结果的准确性,采用PCR技术扩增管家基因invA。提取可疑菌落的DNA作为模板,使用特异性引物进行PCR扩增。引物序列为:上游引物5-GTAAAATATGTCGGGGACTTTCGC-3,下游引物5-TCCCCCAAGGAAGATCAATAC-3。PCR反应条件为:94℃预变性5分钟;94℃变性30秒,55℃退火30秒,72℃延伸1分钟,共进行35个循环;最后72℃延伸10分钟。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测,若出现约284bp的特异性条带,则判定为沙门氏菌阳性。通过这种选择性培养基与分子生物学相结合的方法,有效提高了沙门氏菌分离鉴定的准确性与特异性。
(二)耐药性表型检测
药
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