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741杨组培苗对多溴联苯醚的耐受性及PtABCB27基因功能解析

一、引言

1.1研究背景

多溴联苯醚（PolybrominatedDiphenylEthers，PBDEs）作为一类重要的溴代阻燃剂，曾被广泛应用于电子、建筑、交通、石油等诸多工业领域。由于其阻燃效率高、热稳定性好且与高分子材料兼容性强，自20世纪70年代起，PBDEs的使用量不断攀升。然而，随着研究的深入，PBDEs的环境危害逐渐引起人们的关注。

PBDEs具有环境持久性，极难通过物理、化学或生物降解，一旦进入环境体系，可在水体、土壤和底泥等环境介质中存留数年甚至更长时间。其还具有远距离传输的特性，能够随着大气环流或水流进行长距离迁移，从而扩大污染范围。PBDEs具有高生物蓄积性和生物放大效应，可通过食物链在生物体内不断积累，对生物和人体健康产生严重威胁。毒理学研究表明，PBDEs会干扰甲状腺激素，妨碍脑部和中枢神经系统的正常发育，还可能对生殖系统、免疫系统等造成损害。在燃烧、高温分解时，PBDEs还会产生多溴二苯并二噁英及多溴二苯并呋喃等毒性更强的物质。

鉴于PBDEs的环境危害性，其已被《斯德哥尔摩公约》列为首批溴代持久性有机污染物，全球产量自2003年起逐年下降。尽管如此，废弃产品及环境介质中残留的PBDEs仍然是人类社会面临的重大挑战，开发高效修复技术以治理PBDEs环境污染迫在眉睫。

在众多环境修复技术中，植物修复因其成本低、环境友好等优点而备受关注。杨树作为一种广泛分布且生长迅速的树种，在环境修复领域具有巨大的应用潜力。杂交741杨（Populusalba×(Populusdavidiana+Populussimonii)×Populustomentosa）是我国常用的林木模式树种之一，具有生长快、适应性强、繁殖容易等特点。研究741杨对多溴联苯醚的耐受性及相关基因功能，对于揭示植物对PBDEs的耐受机制，开发基于杨树的环境修复技术具有重要意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在深入探究741杨组培苗对多溴联苯醚的耐受机制，明确PtABCB27基因在其中的具体功能。通过本研究，期望能够揭示741杨对PBDEs的耐受机制，为植物抗污染基因工程提供理论依据。筛选出与741杨对PBDEs耐受性相关的关键基因，为培育具有高耐受性的转基因杨树提供基因资源。基于研究结果，开发利用741杨进行PBDEs污染土壤和水体修复的技术，为环境修复实践提供技术支持。

1.3研究内容与方法

本研究主要内容包括：通过设置不同浓度的PBDEs处理741杨组培苗，观察其生长状况、生理指标变化等，研究741杨组培苗对多溴联苯醚的耐受性。克隆741杨中的PtABCB27基因，构建表达载体并转化模式植物，通过功能互补实验等方法验证PtABCB27基因的功能。分析不同PBDEs处理条件下741杨中PtABCB27基因的表达水平，以及基因表达与耐受性之间的关联。

在研究方法上，将准备741杨组培苗、PBDEs标准品、培养基及相关试剂等实验材料。通过在培养基中添加不同浓度的PBDEs，对741杨组培苗进行处理，定期观察记录其生长状况，测定生物量、根系发育等指标。采用CTAB法提取741杨基因组DNA，通过PCR扩增、克隆等技术获得PtABCB27基因，构建表达载体后转化大肠杆菌、农杆菌等，再通过浸花法等转化模式植物。利用实时荧光定量PCR技术分析PtABCB27基因在不同处理条件下的表达水平，通过生物信息学分析等方法探讨基因表达与耐受性的关联。

二、多溴联苯醚概述

2.1多溴联苯醚的结构与性质

多溴联苯醚（PBDEs）是一类含有多个溴原子的联苯醚类化合物，其化学通式为C_{12}H_{(0-9)}Br_{(1-10)}O，由两个苯环通过醚键连接而成，且苯环上不同位置连接着1-10个溴原子。这种结构决定了PBDEs存在众多同分异构体，理论上共有209种。不同溴原子取代位置和数量的异构体，在物理化学性质和环境行为上存在差异。例如，低溴代联苯醚（如BDE-47、BDE-99）与高溴代联苯醚（如BDE-209）相比，由于溴原子数量较少，分子间作用力相对较弱，导致其蒸汽压相对较高。

PBDEs通常为无色或淡黄色固体，具有较高的熔点和沸点。由于其分子结构中含有大量的溴原子，使得PBDEs具有较高的密度，一般在2.4-2.7g/cm^3。PBDEs难溶于水，这是因为其分子结构中的苯环和溴原子使其具有较强的疏水性；但易溶于有机溶剂，如正己烷、二氯甲烷等，这一特性使得PBDE