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宁夏地区牛源肠球菌的分离鉴定、耐药性及基因特征研究

一、引言

1.1研究背景

随着经济的发展和人民生活水平的提高，人们对肉制品，尤其是牛肉的需求日益增加。牛肉作为人们餐桌上常见的肉制品之一，其质量安全直接关系到人体健康。然而，牛源肠球菌病，如牛痢疾等，是一种严重的感染性疾病，主要侵害牛的肠道，对牛的健康和牛肉产业发展造成了严重影响。若牛肉被牛源肠球菌污染，还会对人体健康构成潜在威胁。

牛源肠球菌广泛存在于牛群中，具有较强的传播能力。已有研究表明，牛源肠球菌在全球范围内均有分布，且存在不同的生物学类型。肠球菌是一种重要的条件性致病菌，常栖居于人和温血脊椎动物的肠道中，也广泛分布于土壤、水和食物中。它通常被认为是对人和动物无害的共栖菌，但近年来，肠球菌作为条件致病菌所引起的感染率持续升高，可感染多种动物，是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，美国医院感染监视系统（NNIS）已将其列为医院感染的第二大病原菌。肠球菌不仅能引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可能引发危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等严重疾病，同时也是导致院内泌尿道感染的第二致病原因和院内菌血症的第三位致病因。与其他临床上重要的革兰阳性菌相比，肠球菌具有更强的天然耐药性，且更易被诱导产生新的耐药性，几乎所有肠球菌都对头孢菌素、克林霉素、磺胺类、低浓度氨基糖苷类抗生素天然耐药，其耐药性包括固有耐药、获得性耐药及耐受性三种类型。自20世纪80年代出现氨基糖苷类高水平耐药肠球菌以来，给临床治疗肠球菌感染带来了极大困难。此外，肠球菌还可以在人与动物之间进行水平传播，这使得对牛源肠球菌的研究具有重要的公共卫生意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在对宁夏部分地区的牛源肠球菌进行分离鉴定，分析其耐药性，并检测相关基因。通过这些研究，期望能够明确宁夏部分地区牛源肠球菌的种类和生物学特性，了解其耐药情况及相关基因的分布，为预防和控制牛源肠球菌病提供科学依据，为临床合理用药提供指导，同时也为抗菌药物的开发和应用提供思路，进而保障牛群健康和牛肉质量安全，促进牛肉产业的可持续发展。

1.3国内外研究现状

在国外，对牛源肠球菌的研究开展较早且较为深入。在分离鉴定方面，已经建立了多种先进的技术方法，包括基于分子生物学的16SrRNA基因测序技术、多位点序列分型（MLST）技术等，这些技术能够更加准确、快速地鉴定牛源肠球菌的种类和亚型。在耐药性研究上，国外学者对牛源肠球菌的耐药谱、耐药机制以及耐药基因的传播规律进行了大量研究，发现牛源肠球菌对多种抗生素呈现耐药性，且耐药基因可以通过质粒、转座子等可移动遗传元件在不同菌株之间传播，增加了耐药性扩散的风险。

国内对牛源肠球菌的研究也取得了一定进展。在分离鉴定方面，除了采用传统的细菌形态学观察、生化试验等方法外，也逐渐引入了分子生物学技术，如基于肠球菌保守tuf基因的PCR方法等，提高了鉴定的准确性和效率。在耐药性研究方面，国内研究表明，不同地区的牛源肠球菌耐药情况存在差异，且耐药率呈上升趋势。例如，有研究检测了河南地区肉牛运输前后牛源肠球菌的耐药基因，发现携带耐药基因aac（6’）／aph（2＂）阳性菌株的阳性率为31.1%，携带ant（6）-Ⅰ的阳性菌株阳性率为20%。还有研究对宁夏地区某养殖场致奶牛和肉牛死亡的病原菌进行分离鉴定，发现分离得到的屎肠球菌和粪肠球菌对多种抗生素耐药，且携带多种毒力基因。此外，国内学者还对牛源肠球菌的毒力基因、致病性等方面进行了研究，为深入了解牛源肠球菌的致病机制提供了理论基础。然而，目前对于宁夏部分地区牛源肠球菌的研究还相对较少，尤其是在耐药性和相关基因检测方面的系统研究尚显不足，因此开展本研究具有重要的现实意义。

二、材料与方法

2.1样品采集

2.1.1采样地点选择

在宁夏地区，综合考虑牛群规模、养殖模式以及地域分布等因素来选取牛场和畜牧场。选择牛群规模较大的场所，能够获取更具代表性的样本，以反映不同规模养殖环境下牛源肠球菌的情况。养殖模式涵盖了规模化养殖和散养两种典型模式，规模化养殖模式下，牛只饲养密度大、管理相对集中，可能会影响肠球菌的传播和特性；散养模式中，牛只活动范围广、接触环境复杂，也会对肠球菌的存在和变异产生作用。地域分布上，选取了宁夏北部、中部和南部不同地理位置的牛场，这些地区的气候、饲料资源以及养殖习惯存在差异，可能导致牛源肠球菌的种类和耐药性有所不同。通过在这些不同类型的牛场和畜牧场进行采样，能够全面地了解宁夏地区牛源肠球菌的整体情况。

2.1.2样品类型及数量

采集牛肝和牛肠作为样品，主要是因为牛源肠球菌常寄生于牛的肠道中，牛肠是其主要的生存环境，直接采集牛肠能够更直接地获取肠球菌；而牛肝作为牛体内重要的代谢器官，当牛源肠球菌引发全身