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过氧化物酶（POD）活性测定
【实验原理】
过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H0存在条件下，过氧化物酶能使愈创木
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酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L磷酸缓冲液（pH6.0）、反应
混合液[100mmol/L磷酸缓冲液（Ph6.0）50mL，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，
待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存在冰箱中]
【方法步骤】
（1）、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g，加20mmol/LKH2PO42.5mL，于研钵中研成匀浆，以
4000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO42.5mL提取一次，
全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
（2）、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，
另外三只中加入反应混合液3mL，稀释后的酶液1mL（如表1），立即开启秒表，于分光光度计470nm
波长下测量OD值，每隔1min读数一次（4min）。以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加
0.01定义为一个活力单位。
表1紫外吸收法测定POD酶活性配置表
管号S0（对照）S1（实验）S2（实验）
反应混合液(ml)3.03.03.0
KH2PO4(ml)1.00.00.0
酶液(ml)0.01.01.0
4.结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA470/[min·g（鲜重）]表示之。
也可以用每min内A470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（u）表示。
AV
470T
0.01VtFW
1
POD总活性[u/g(FW)]=
式中：POD总活性以酶单位每克鲜重表示。其中△470=ACK-AE
比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示。
ACK——照光对照管的吸光度。
AE——样品管的吸光度。
Vt——样品液总体积，mL。
V1——测定时样品用量，mL。
W——样品鲜重，g。
蛋白质含量单位为mg/g。
过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法
【原理】
HO在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A)随反应
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时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【试剂】
0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液：取A液91.5ml，B液8.5ml,充分混合。
0.1mol/LHO以30%的过氧化氢稀释(30*1.1g/34.01)mol/100ml=9.7mol/L,取0.52ml30%的过
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氧化氢稀释到50ml.
【方法】
1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2ml4℃下预冷的pH7.8
磷酸缓冲液和少量石英砂
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