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林木基因编辑敲入效率提升试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.以下哪种技术常用于基因敲入？（）

A.CRISPR/Cas9B.RNAiC.Southernblot

答案：A

2.基因敲入是将外源基因整合到（）。

A.线粒体B.基因组特定位置C.内质网

答案：B

3.提高基因敲入效率可优化（）。

A.培养温度B.载体设计C.光照时间

答案：B

4.以下哪种是常用的基因载体？（）

A.质粒B.多糖C.脂肪

答案：A

5.基因敲入过程中Cas9蛋白作用是（）。

A.切割DNAB.连接DNAC.转录DNA

答案：A

6.优化供体DNA设计可（）敲入效率。

A.降低B.提高C.无影响

答案：B

7.基因编辑敲入实验中，对细胞状态要求（）。

A.无要求B.处于活跃分裂期C.静止期

答案：B

8.以下能提升敲入效率的是（）。

A.增加Cas9浓度B.减少供体DNA量C.改变培养皿材质

答案：A

9.基因敲入效率检测常通过（）。

A.测序B.比色法C.荧光定量PCR

答案：A

10.哪种细胞类型更利于基因敲入？（）

A.分化成熟细胞B.干细胞C.凋亡细胞

答案：B

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.影响林木基因敲入效率的因素有（）

A.载体类型B.细胞类型C.环境温度

答案：ABC

2.以下属于基因编辑工具的有（）

A.CRISPR/Cas9B.TALENsC.ZFNs

答案：ABC

3.优化基因敲入效率可从哪些方面入手（）

A.载体构建B.供体DNA设计C.实验操作流程

答案：ABC

4.选择基因载体需考虑（）

A.大小B.复制能力C.抗性标记

答案：ABC

5.提高敲入效率的策略有（）

A.优化sgRNA设计B.增强细胞活性C.改进转染方法

答案：ABC

6.基因敲入实验包括以下哪些步骤（）

A.载体构建B.细胞转染C.效率检测

答案：ABC

7.影响Cas9蛋白活性的因素有（）

A.温度B.浓度C.缓冲液成分

答案：ABC

8.供体DNA设计要点有（）

A.长度B.序列同源性C.修饰情况

答案：ABC

9.可用于检测基因敲入效率的技术有（）

A.测序B.荧光成像C.Westernblot

答案：ABC

10.细胞转染方法有（）

A.脂质体转染B.电穿孔C.病毒介导转染

答案：ABC

三、判断题（每题2分，共10题）

1.基因敲入只能在动物细胞中进行。（×）

2.CRISPR/Cas9是唯一的基因编辑工具。（×）

3.提高供体DNA浓度一定能提升敲入效率。（×）

4.细胞状态对基因敲入效率无影响。（×）

5.载体大小不影响基因敲入。（×）

6.优化sgRNA设计可提高敲入精准度。（√）

7.基因敲入效率检测只能用测序。（×）

8.温度不会影响Cas9蛋白活性。（×）

9.不同细胞类型基因敲入效率可能不同。（√）

10.改进转染方法能提升基因敲入效率。（√）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述提高林木基因敲入效率的主要策略。

答：优化载体构建，使载体更适合导入与整合；合理设计供体DNA，提高同源重组效率；改进转染方法，增强细胞对基因的摄取；选择合适细胞类型，处于活跃分裂期的细胞更优。

2.说明基因敲入实验中载体构建的要点。

答：选择合适载体，考虑其大小、复制能力、抗性标记等；确保载体能携带外源基因准确导入细胞；构建时保证基因表达元件完整，以便外源基因正常表达。

3.简述供体DNA设计对基因敲入效率的影响。

答：供体DNA长度要合适，过短影响重组，过长可能不稳定；序列同源性要高，利于与目标位点重组；其修饰情况也会影响在细胞内的稳定性与重组效率。

4.如何检测基因敲入效率？

答：可通过测序直接查看外源基因是否准确敲入及敲入比例；荧光成像利用标记基因观察表达情况推测敲入效率；还能用Westernblot检测敲入基因表达的蛋白量来评估。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.讨论基因编辑技术在林木遗传改良中的应用前景与挑战。

答：前景广阔，可精准改良性状，如提高抗逆性、生长速度等。但面临挑战，如基因敲入效率低、可能产生脱靶效应，且技术成本高，公众对转基因林木接受度有待