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生物制药分离纯化技术演讲人：日期:

目录CATALOGUE02主要分离方法03纯化核心技术04应用案例分析05优化与挑战06发展趋势展望01技术基础概述

01技术基础概述PART

定义与核心作用分离纯化技术定义指通过物理、化学或生物方法将目标产物从复杂混合物中提取并纯化的过程，是生物制药生产中的核心环节，直接影响药物纯度和收率。产业价值占生物制药总成本的60%-80%，高效分离技术可显著降低生产成本并提高产能，推动生物类似药和创新药的商业化进程。核心作用确保生物制品（如重组蛋白、疫苗、抗体等）的纯度达标（通常要求≥99%），去除宿主细胞蛋白、核酸、内毒素等杂质，满足药典和监管机构对安全性和有效性的严格要求。

基本原理与流程层析分离原理典型工艺流程膜分离技术基于分子大小（凝胶过滤）、电荷（离子交换）、疏水性（疏水作用）或亲和力（亲和层析）的差异实现目标物选择性吸附与洗脱，需优化缓冲液pH、电导率等参数。采用微滤、超滤或纳滤膜实现分子量截留，关键控制参数包括跨膜压力、切向流速和膜包再生次数，常用于病毒去除或蛋白浓缩。细胞破碎→离心澄清→初级捕获（如ProteinA层析）→中间纯化（离子交换）→精纯（分子排阻）→除病毒过滤，全程需保持低温环境防止蛋白变性。

关键性能参数动态载量（DBC）衡量层析介质在特定流速下吸附目标物的能力，通常需≥50mg/mL介质，直接影响设备规模和运行成本。回收率与纯度目标产物回收率需＞90%，HCP残留＜100ppm，DNA残留＜10ng/剂量，需通过ELISA、SDS等方法严格检测。通量与寿命深层过滤系统需保持＞100LMH的通量，层析介质需耐受100次以上CIP循环，不锈钢系统需符合ASMEBPE标准。

02主要分离方法PART

色谱技术类型利用高压驱动流动相通过固定相，实现复杂混合物中目标成分的高分辨率分离，广泛应用于蛋白质、多肽等生物大分子的纯化。高效液相色谱（HPLC）基于目标分子与固定相表面带电基团的静电相互作用进行分离，特别适用于带电荷生物分子（如核酸、抗体）的精细纯化。离子交换色谱（IEC）通过生物特异性结合（如抗原-抗体、酶-底物）实现高选择性分离，常用于单克隆抗体和重组蛋白的捕获步骤。亲和色谱（AC）利用蛋白质表面疏水区域与固定相的相互作用，在高盐条件下吸附目标物，适用于稳定性较差的生物分子分离。疏水作用色谱（HIC）

过滤与膜分离深层过滤技术采用纤维素或硅藻土等多孔介质，通过吸附和机械截留去除发酵液中的细胞碎片和胶体颗粒，处理量可达数千升/小时。切向流过滤（TFF）流体平行于膜表面流动，减少膜污染，主要用于蛋白质浓缩和缓冲液置换，典型应用包括单抗的洗滤和透析。超滤/微滤膜分离超滤膜（1-100nm）可截留蛋白质和病毒，微滤膜（0.1-10μm）用于细菌和细胞分离，需根据目标分子量选择膜截留分子量。纳滤技术介于反渗透和超滤之间（1-10nm），能有效去除小分子杂质同时保留产物活性，在抗生素纯化中表现突出。

离心与沉淀差速离心技术通过梯度转速分离不同沉降系数的组分，如从细胞裂解液中分离细胞器时，需依次采用1000g（细胞核）、10000g（线粒体）等离心力。01密度梯度离心采用蔗糖或碘克沙醇建立密度梯度，利用等密度原理分离病毒颗粒或亚细胞结构，分辨率可达纳米级别。盐析沉淀法通过高浓度硫酸铵（40-80%饱和度）改变蛋白质溶解度，常用于抗体初级纯化，需严格控制pH和温度以避免变性。等电点沉淀技术调节pH至目标蛋白等电点使其净电荷为零而沉淀，对两性电解质（如胰岛素）特别有效，但需配合后续复溶步骤。020304

03纯化核心技术PART

亲和层析应用抗体纯化亲和层析广泛应用于单克隆抗体和多克隆抗体的分离纯化，通过将ProteinA/G或抗原配体固定在色谱介质上，特异性结合抗体Fc段或抗原结合位点，实现高纯度抗体的高效捕获。重组蛋白纯化利用His-Tag、GST-Tag等融合标签与镍柱或谷胱甘肽树脂的特异性结合，可从复杂细胞裂解液中一步纯化目标重组蛋白，纯化效率可达90%以上。核酸分离通过Oligo(dT)纤维素柱与mRNA的poly(A)尾互补结合，可从总RNA中分离高纯度mRNA，广泛应用于分子生物学研究。病毒颗粒捕获肝素亲和层析可选择性结合包膜病毒的表面糖蛋白，用于疫苗生产中病毒样颗粒（VLPs）的规模化纯化。

离子交换纯化强阴离子交换树脂（如QSepharose）通过结合DNA磷酸骨架，可在高盐条件下选择性洗脱超螺旋质粒，去除开环DNA和RNA。质粒DNA纯化????0104????03??02??混合床离子交换系统可同时去除水中的阳离子（Na+,Ca2+）和阴离子（Cl-,SO42-），产水电阻率可达18.2MΩ·cm。水处理脱盐根据蛋白质等电点差异，在pH梯