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microRNA深度测序解析猕猴桃性别分化的分子奥秘

一、引言

1.1研究背景与意义

猕猴桃（Actinidia）隶属猕猴桃科猕猴桃属，是多年生雌雄异株落叶藤本植物。中国作为猕猴桃的起源中心，在全球已发现的猕猴桃66个种、约118个分类单位（变种、变型）中，有59个种原产我国，分布于27个省、市、自治区，并以云南为多样性发展中心。猕猴桃果实不仅风味独特，酸甜可口，而且营养丰富，富含维生素C、维生素E、钾、镁等多种营养成分，享有“维C之冠”“世界珍果”等美誉，具有较高的食用价值和保健功能。除鲜食外，猕猴桃还可加工成果汁、果酱、果酒、果脯等多种产品，在食品、医药等行业有着广泛应用，具有显著的经济价值，为果农带来了可观的经济效益，推动了地方特色农业经济的发展。

在猕猴桃种植中，性别分化研究至关重要。猕猴桃为雌雄异株植物，雌株负责结果，雄株提供花粉，合理的雌雄比例和准确的性别鉴定是实现高产优质的关键。雌株数量直接影响果实产量，而雄株的花期和花粉质量对授粉和坐果率起着决定性作用。若雌雄比例失调或花期不遇，会导致授粉不良，坐果率降低，果实品质下降，从而影响果农的经济收益。传统的猕猴桃性别鉴定方法主要依赖于植株形态特征、生理生化指标等，这些方法往往需要等到植株生长到一定阶段才能进行判断，且准确性易受环境因素影响，无法满足早期、精准鉴定的需求。因此，深入研究猕猴桃性别分化机制，寻找有效的早期性别鉴定方法，对于优化猕猴桃种植结构、提高果实产量和品质具有重要意义。

随着生物技术的不断发展，microRNA深度测序技术为猕猴桃性别分化研究提供了新的契机。microRNA（miRNA）作为一类长度约为21-23个核苷酸的非编码单链小RNA分子，在植物生长发育、代谢调控、逆境响应等过程中发挥着关键作用。通过对猕猴桃雌雄花中miRNA的深度测序和分析，可以全面揭示miRNA在性别分化过程中的表达谱变化，筛选出与性别分化相关的关键miRNA及其靶基因，深入解析其调控网络，为猕猴桃性别分化的分子机制研究提供理论依据。这不仅有助于我们从分子层面深入理解猕猴桃性别分化的本质，还能为开发基于miRNA的早期性别鉴定技术提供技术支持，推动猕猴桃产业的可持续发展。

1.2猕猴桃性别分化研究现状

猕猴桃属植物绝大多数为雌雄异株，但偶有少数雌雄同株或两性花的情况，存在性别的多样性。其性别分化发生于花芽发育的后期，一般在开春后，由越冬的腋芽分化出花序原基，然后依次分化出花原基、萼片原基、花瓣原基、雄蕊原基和雌蕊原基。在这个过程中，雌雄花的分化逐渐显现出差异，雌株的雄花与雄株的雌花在形态上虽为两性花，但在生理上属于单性花，这种独特的性别表现类型在进化上处于较原始阶段，使其成为研究植物性别起源与进化、初始性别控制及其性别发育的模式植物。

在细胞形态学方面，研究人员利用光学显微镜和电子显微镜等技术，对不同性别和不同发育阶段的猕猴桃细胞结构进行了详细观察。发现在细胞分裂和分化阶段，雌雄性猕猴桃的细胞在形态、大小、核质比例等方面存在明显差异。特别是在花药和子房的发育过程中，这些差异表现得尤为明显。雄性花粉囊中花粉粒数量较多，而雌性子房中则存在大量的胚珠和胚囊细胞。不同性别猕猴桃的细胞壁结构、细胞器和亚细胞结构也存在差异，这些差异可能与果实的口感、营养成分和抗病能力密切相关。然而，细胞形态学观察只能从表象上揭示性别分化过程中的一些变化，难以深入探究其内在的分子机制。

分子标记技术为猕猴桃性别分化研究提供了新的手段。通过AFLP、RAPD等分子标记技术，研究人员试图寻找与猕猴桃性别相关的分子标记。如姚春潮等利用RAPD技术获得了猕猴桃雄性基因RAPD标记S1032-850，并将其应用于性别鉴定。但目前已发现的分子标记存在稳定性差、通用性不强等问题，难以在实际生产中广泛应用。此外，这些分子标记往往只能反映基因组的部分特征，无法全面揭示性别分化过程中的基因表达调控网络。

生理生化研究表明，猕猴桃性别分化与植物激素、酶活性、蛋白质和核酸含量等生理生化指标密切相关。在花芽分化过程中，雌雄株体内的生长素、细胞分裂素、赤霉素等激素含量存在明显差异。过氧化物酶、多酚氧化酶等酶的活性也表现出性别特异性。然而，生理生化指标易受环境因素的影响，不同研究结果之间存在一定的差异，且这些指标与性别分化之间的因果关系尚不明确，需要进一步深入研究。

1.3microRNA概述及在植物中的作用

microRNA（miRNA）是一类长度为21-23个核苷酸，进化上较保守的非编码蛋白质的单链小RNA分子。其形成过程较为复杂，首先在细胞核中，由RNA聚合酶Ⅱ转录生成具有帽子结构和多聚腺苷酸尾巴的初级转录本（pri