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异甘草酸镁：放射性肺损伤治疗新曙光——作用与机制探究

一、引言

二、材料与方法

2.1实验材料

实验动物选用SPF级雌性C57BL/6小鼠，6-8周龄，体重18-22g，购自[实验动物供应商名称]。小鼠饲养于温度（22±2）℃、相对湿度（50±10）%的环境中，12h光照/12h黑暗循环，自由摄食和饮水。

实验所需的异甘草酸镁注射液购自[生产厂家]；戊巴比妥钠购自[试剂公司]；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒、Masson染色试剂盒购自[生物公司]；小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、角蛋白A（LAP）和超氧化物歧化酶（SOD）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒均购自[生物科技公司]。

主要仪器设备包括：医用直线加速器（[型号]，[生产厂家]）用于小鼠肺部照射；电子天平（[型号]，[品牌]）用于称量小鼠体重；石蜡切片机（[型号]，[生产厂家]）、显微镜（[型号]，[品牌]）用于肺组织病理学检测；酶标仪（[型号]，[品牌]）用于ELISA检测。

2.2实验方法

2.2.1放射性肺损伤小鼠模型构建

将小鼠适应性饲养1周后，采用医用直线加速器产生的6MVX射线对小鼠进行全肺单次照射，照射剂量为18Gy，照射野大小为2cm×2cm，源皮距为100cm。照射时小鼠经腹腔注射1%戊巴比妥钠（50mg/kg）麻醉后，俯卧位固定于特制的小鼠照射固定板上，使用铅块屏蔽小鼠其他部位，仅暴露肺部接受照射。照射后将小鼠放回饲养笼中正常饲养。建模成功的判断标准为：照射后小鼠出现精神萎靡、活动减少、呼吸急促、体重下降等表现，且肺组织病理学检查显示肺充血、水肿、炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚等典型的放射性肺损伤改变。

2.2.2分组与干预

将建模成功的小鼠随机分为4组，每组10只，分别为假手术组、放疗组、异甘草酸镁低剂量组、异甘草酸镁高剂量组。假手术组小鼠仅进行麻醉和固定，不接受X射线照射；放疗组小鼠接受X射线照射，照射后给予等体积生理盐水腹腔注射；异甘草酸镁低剂量组小鼠接受X射线照射后，给予异甘草酸镁（20mg/kg）腹腔注射；异甘草酸镁高剂量组小鼠接受X射线照射后，给予异甘草酸镁（40mg/kg）腹腔注射。各组小鼠均每天注射1次，连续注射28天。

2.2.3观察指标与检测方法

体重变化：从实验开始当天起，每周使用电子天平称量小鼠体重1次，记录体重变化情况，观察异甘草酸镁对小鼠体重的影响。

肺组织病理学检测：实验结束后，各组小鼠经腹腔注射过量戊巴比妥钠麻醉后，迅速取出肺组织，用4%多聚甲醛固定24h，常规石蜡包埋，切片厚度为4μm。分别进行HE染色和Masson染色，在光学显微镜下观察肺组织的病理形态学变化，包括肺泡结构、炎症细胞浸润、纤维化程度等，并进行图像采集和分析。

血清炎症因子及相关指标检测：实验结束时，小鼠眼眶取血，3000r/min离心15min，分离血清。采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、LAP和SOD的含量，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。其原理是利用双抗体夹心法，将抗小鼠TNF-α、IFN-γ、LAP和SOD抗体包被于酶标板上，加入血清样本后，样本中的相应抗原与包被抗体结合，再加入辣根过氧化物酶标记的抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经洗板去除游离成分后，加入显色底物，在酶的催化下呈现颜色变化，颜色的深浅与样品中的抗原浓度呈正相关，最后用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中各指标的浓度。

三、异甘草酸镁对放射性肺损伤的改善作用

3.1对小鼠体重的影响

在整个实验周期内，对各组小鼠体重进行动态监测。结果显示，假手术组小鼠体重呈现稳步增长趋势，每周体重增长较为稳定，这表明正常饲养条件下小鼠生长发育正常。而放疗组小鼠在接受X射线照射后，体重增长明显受到抑制，与假手术组相比，从照射后第1周开始体重增长速度显著减缓，在后续几周体重甚至出现不同程度的下降。这是由于放射性肺损伤导致小鼠肺部功能受损，影响了机体的正常代谢和营养摄取，进而导致体重变化异常。

给予异甘草酸镁干预的两组小鼠体重变化趋势则与放疗组有所不同。异甘草酸镁低剂量组小鼠体重在照射后虽也有一定程度的增长缓慢，但下降幅度明显小于放疗组，且在实验后期体重有逐渐上升的趋势。异甘草酸镁高剂量组小鼠体重受影响程度更小，体重下降幅度明显低于低剂量组，并且在实验后期体重增长趋势更为明显，逐渐接近假手术组的增长水平。这表明异甘草酸镁能够有效减轻放射性肺损伤对小鼠体重的负面影响，且呈现一定的剂量依赖性，即随着异甘草酸镁剂量的增加，对小鼠体重的改善作用更为