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甘菊ALDH超家族基因解析及DlBADH基因对切花菊的转化探究

一、引言

1.1研究背景与意义

花卉作为美化环境、表达情感的重要载体，在人类生活中占据着不可或缺的地位。甘菊（Chrysanthemumlavandulifolium）作为菊属植物中的二倍体物种，是菊花（C.xmorifolium）的重要野生近缘物种，具有相对简单的遗传背景。其不仅具备一定的观赏价值，在医药领域也展现出独特的功效，如含有挥发油、黄酮类、咖啡酸、芦丁等成分，具有镇静、消炎、镇痛、抗过敏等作用，被广泛应用于中药制剂及保健品的生产。此外，甘菊在菊属植物的研究中发挥着关键作用，通过对其基础生物学问题的探究，能够为解析菊花主要观赏性状的形成机制提供重要参考。

切花菊（Dendranthemagrandiflorum(Ramat)Kitam）作为全球四大切花植物之首，是国际商品花卉中总产值最高的花种。它原产于中国，是传统名花之一，以其艳丽的色彩、多样的花形和不畏严寒、傲霜怒放的品格备受青睐。切花菊用途广泛，耐运耐贮，瓶插寿命长，繁殖栽培容易，能周年供应，成本低且产出高，在园艺、景观和生物医药领域都有广泛应用。随着人们生活水平的提高，对切花菊的品质和多样性提出了更高要求，传统育种方式难以满足市场对切花菊花色、抗逆性等多方面的需求。

基因工程技术的飞速发展为花卉育种带来了新的契机。醛脱氢酶（ALDH）超家族基因在植物的生长发育、抗逆反应以及次生代谢产物合成等过程中发挥着关键作用。BADH（甜菜碱醛脱氢酶）基因作为ALDH超家族的重要成员，参与甜菜碱的合成，而甜菜碱在植物应对逆境胁迫时能够起到调节渗透压、稳定生物大分子结构等作用，从而增强植物的抗逆性。对甘菊ALDH超家族基因进行分离和研究，尤其是深入探究DlBADH基因的功能，并将其转化到切花菊中，有望培育出具有更强抗逆性、更好观赏品质的切花菊新品种，这对于推动花卉基因工程育种的发展，提高切花菊在全球花卉市场的竞争力具有重要的现实意义。同时，也能为其他花卉的基因工程改良提供理论基础和技术支持，丰富花卉种质资源，满足人们日益增长的对高品质花卉的需求。

1.2国内外研究现状

在甘菊ALDH超家族基因研究方面，目前已对甘菊的生物学特性、栽培繁育途径、细胞及组织培养的方法和分子遗传学等有了一定研究，但针对ALDH超家族基因的分离与功能鉴定仍处于初步阶段。国内外学者利用生物信息学方法对ALDH家族成员的蛋白理化性质、亚细胞定位、三维模型构建及系统进化树绘制等方面开展了一些工作，发现ALDH家族间序列相似性较高但同源性相对较低，氨基酸序列差异较大，各家族成员的催化位点和结合区域有较大差异，赋予了不同的催化活性。然而，对于甘菊中该家族基因在应对环境胁迫和调控次生代谢等方面的具体作用机制尚不明晰。

关于DlBADH基因，在其他植物中已有较多研究表明其在提高植物抗逆性方面发挥重要作用。例如，在一些农作物中导入BADH基因后，植株的耐盐、耐旱等能力显著增强。但在花卉领域，特别是针对甘菊和切花菊的研究较少。目前尚未见将甘菊DlBADH基因成功转化到切花菊并对其功能进行系统分析的报道。

在切花菊基因转化方面，虽然花卉基因工程已在花色、花形、株型、生长发育、香味、采后保鲜等方面取得了重要进展，如利用基因工程技术成功改变了一些花卉的花色，通过抑制内源基因或导入外源基因定向改变花卉的某一性状而不影响其它性状，并且缩短育种周期。但切花菊的基因转化研究仍面临诸多挑战，如转化效率较低、转化后植株的稳定性和安全性评估不够完善等问题。此外，针对切花菊抗逆基因转化的研究相对较少，限制了切花菊在不同环境条件下的广泛种植和应用。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入挖掘甘菊中的优良基因资源，通过分离甘菊ALDH超家族基因，明确DlBADH基因的功能，并将其成功转化到切花菊中，培育出具有优良抗逆性的切花菊新品种，为切花菊的基因工程育种提供理论依据和技术支持。具体研究内容如下：

甘菊ALDH超家族基因的分离与鉴定：采用RT-PCR、RACE等技术，从甘菊中分离ALDH超家族基因的全长cDNA序列，通过生物信息学方法对其进行序列分析，包括开放阅读框、氨基酸序列、蛋白质结构域等预测，构建系统进化树，明确其在ALDH超家族中的分类地位。

DlBADH基因的功能分析：构建DlBADH基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达并纯化重组蛋白，通过酶活性测定、底物特异性分析等实验，研究其生物学功能。同时，利用转基因技术，将DlBADH基因转入拟南芥或烟草等模式植物中，分析转基因植株在盐胁迫、干旱胁迫等逆境条件下的生长表型、生理指标变化，进一步验证其抗逆功能。

DlBADH