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微生物检验操作规范

一、总则

微生物检验是确保产品质量、食品安全和环境安全的重要手段。本规范旨在统一微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。检验人员应严格遵守本规范，熟悉相关设备、试剂和操作方法，并保持良好的实验室习惯。

二、检验前的准备

（一）设备和材料

1.超净工作台：确保洁净度达到≥30级，定期进行消毒和校准。

2.高压灭菌锅：灭菌温度115℃-121℃，压力≥103kPa，灭菌时间15-20分钟。

3.恒温培养箱：温度控制精度±0.5℃，常用温度37℃。

4.显微镜：放大倍数1000×，分辨率≥0.2μm。

5.无菌容器：包括培养皿、试管、移液管等，需灭菌处理。

6.培养基：根据检验需求选择，如营养琼脂、麦康凯琼脂等。

（二）人员准备

1.检验人员需经过专业培训，熟悉微生物检验基本原理和操作流程。

2.操作前需洗手消毒，穿戴洁净工作服、手套和口罩。

（三）样品准备

1.样品采集：根据检验目的选择合适的采样方法，如表面擦拭、液体取样等。

2.样品保存：采集后的样品应立即冷藏（4℃）保存，避免污染和变质。

3.样品处理：根据样品类型选择合适的处理方法，如稀释、过滤等。

三、检验操作步骤

（一）平板计数法

1.样品稀释：将样品按系列稀释（如10倍系列稀释），选择合适的稀释度。

2.倾注培养：取1mL稀释液倒入无菌培养皿，加入熔化后的培养基（45℃），混匀后冷却。

3.计数：待菌落长成后，选择30-300cfu的平板进行计数，计算原始样品中菌落数。

4.结果计算：菌落数（cfu/mL）=（平板菌落数×稀释倍数）/1mL。

（二）菌落总数测定

1.培养基制备：按说明书配制营养琼脂培养基，灭菌后冷却至45℃。

2.样品处理：取样品适量，加入无菌生理盐水稀释。

3.倾注培养：同平板计数法操作。

4.计数与报告：记录菌落数，计算平均值。

（三）大肠菌群测定

1.培养基制备：配制伊红美蓝琼脂（EMB）培养基，灭菌后冷却。

2.样品处理：取样品10g，加入90mL无菌生理盐水匀浆。

3.复苏培养：将样品置于37℃培养24小时，观察是否有典型大肠菌群菌落。

4.选择性平板计数：挑取可疑菌落，接种到LBS平板，37℃培养48小时。

5.结果报告：根据菌落形态和生化试验结果报告大肠菌群数。

（四）沙门氏菌检验

1.增菌培养：取样品，接种到TSB（胰酪大豆胨）液体培养基，37℃培养24小时。

2.选择性平板：将增菌液接种到XLD（亚硒酸盐煌绿琼脂）平板，37℃培养24-48小时。

3.形态观察：挑取可疑菌落进行革兰染色和生化试验。

4.验证：阳性结果需进一步验证，如动力试验、血清学试验等。

四、检验结果与报告

（一）结果记录

1.每项检验需记录原始数据，包括菌落数、菌落形态、生化试验结果等。

2.数据需清晰、完整，避免涂改。

（二）结果报告

1.按照检验目的填写检验报告，包括样品信息、检验方法、结果和结论。

2.报告需经复核人员审核签字后存档。

五、实验室质量控制

（一）阳性对照

每次检验需设置阳性对照，确保培养基和操作方法有效。

（二）阴性对照

检验过程中需设置阴性对照，排除污染风险。

（三）重复检验

对关键项目进行重复检验，确保结果可靠。

六、注意事项

（一）无菌操作

所有操作需在超净工作台内进行，避免污染。

（二）安全防护

操作时需佩戴手套和口罩，避免交叉污染。

（三）设备维护

定期校准和清洁检验设备，确保性能稳定。

七、附录

（一）培养基配方

1.营养琼脂：蛋白胨10g，牛肉浸膏5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。

2.伊红美蓝琼脂：蛋白胨10g，乳糖10g，琼脂15g，伊红0.4g，美蓝0.06g，蒸馏水1000mL。

（二）常用稀释液

生理盐水（0.9%NaCl溶液）。

一、总则

微生物检验是确保产品质量、食品安全和环境安全的重要手段。本规范旨在统一微生物检验的操作流程，确保检验结果的准确性和可靠性。检验人员应严格遵守本规范，熟悉相关设备、试剂和操作方法，并保持良好的实验室习惯。检验过程中需严格控制污染风险，确保所有操作符合无菌要求，同时做好个人防护和实验室环境维护。

二、检验前的准备

（一）设备和材料

1.超净工作台：

（1）使用前需进行空间灭菌，通常采用紫外线照射30分钟，或使用70-75%乙醇气体消毒15分钟。

（2）开启通风系统，检查风速和压力，确保洁净度达到≥30级，气流方向自净区流向污染区。

（3）操作时需穿戴洁净工作服，避免衣物接触工作台面，减少污染风险。

2.高压灭菌锅：

（1）灭菌前检查锅内是否有积水，确保排水通畅。

（2）将待灭菌物品排列整齐，避免过度拥挤，确保蒸汽均匀穿透。

（3）灭菌程序：

①关闭锅盖，设定温度115℃-1