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酶催化2,2-双取代-1,3-环戊二酮去对称性还原的研究与进展

一、引言

1.1研究背景与意义

手性分子作为构成生命体系的基本结构单元，在自然界中广泛存在，且在药物、天然产物、材料科学等众多领域都发挥着至关重要的作用。在药物领域，手性药物的不同对映体在生物活性、药理作用和毒性等方面往往存在显著差异。例如，沙利度胺的(R)-对映体具有镇静作用，而(S)-对映体却会导致严重的出生缺陷，这一惨痛的教训让人们深刻认识到控制药物手性的重要性。在天然产物领域，许多具有生物活性的天然产物，如紫杉醇、青蒿素等，都含有多个手性中心，其独特的手性结构是发挥生物活性的关键。手性分子在材料科学领域也展现出独特的性能，如手性液晶材料被广泛应用于显示器、光学器件和传感器等。

2,2-双取代-1,3-环戊二酮的去对称性还原反应作为构建手性分子的重要策略，在有机合成化学中占据着关键地位。该反应能够将非手性或潜手性的2,2-双取代-1,3-环戊二酮转化为具有特定构型的手性产物，为合成多种具有重要生物活性的化合物提供了关键中间体。以ethylsecodione为底物的去对称性单羰基还原产物是合成甾体类药物左炔诺孕酮（levonorgestrel）、孕二烯酮（gestodene）的关键中间体，而左炔诺孕酮和孕二烯酮作为重要的小分子避孕药物，在全球范围内广泛应用，2018年其全球零售药物排名均在前200名内，销售总额达到20亿美元。利用2-甲基-2-(3-氧代丙基)-1,3-环戊二酮为底物去对称化还原后产物可以用于合成13β-甲基-14β-羟基的甾体化合物。2,2-双取代-1,3-环二酮的去对称化还可用于合成多种结构复杂的生物活性分子，如(1s,5r)-karahanaether和(1s,5r)-karahanalactone等。

1.2研究现状

目前，酶催化2,2-双取代-1,3-环戊二酮去对称性还原的研究取得了一定进展。许多科研团队致力于筛选和改造具有高活性和高立体选择性的酶催化剂。中科院天津工业生物技术研究所朱敦明研究员、吴洽庆研究员带领的生物催化与绿色化工团队，针对ethylsecodione立体选择性还原问题，首先筛选了实验室的百种羰基还原酶，对转化结果进行分析对比，以来源于Ralstoniasp.的羰基还原酶RasADH作为模板，利用结构指导的定向进化策略，经过数轮的改造筛选，获得了能够高效催化底物ethylsecodione的突变酶RasADHF12。该突变酶对底物的活力提高了183倍，目标产物的比例由37.3%提高至99.5%，双羰基还原产物比例由18.8%降低至0.1%，并且实现了公斤级底物的转化，为工业化应用奠定了基础。获得的突变酶具有较好的底物谱，能够应用于多种结构的2,2-双取代-1,3-环戊二酮的去对称性还原，获得单一构型的产物。

然而，当前研究仍面临诸多挑战与问题。一方面，酶的催化活性和立体选择性仍有待进一步提高，以满足工业化生产的需求。不同的2,2-双取代-1,3-环戊二酮底物结构差异较大，现有的酶催化剂难以对所有底物都保持高效的催化性能。另一方面，辅酶再生系统的优化也是一个关键问题。在酶催化反应中，辅酶的消耗往往需要额外的再生系统，如葡萄糖脱氢酶（gdh）和大量的葡萄糖作为辅酶再生的传统方法，存在原子经济性不高、副产物葡萄糖酸影响反应pH值等问题。虽然有研究尝试利用异丙醇等作为辅酶再生的共底物，但仍存在底物位阻影响酶活力等问题。此外，反应条件的优化，如温度、pH值、底物浓度等，也需要进一步深入研究，以实现酶催化反应的高效性和稳定性。

二、酶催化2,2-双取代-1,3-环戊二酮去对称性还原的原理

2.1相关酶的种类及作用机制

在酶催化2,2-双取代-1,3-环戊二酮去对称性还原反应中，羰基还原酶（CarbonylReductase，CR）是最为关键的一类酶。羰基还原酶是一类能够催化醇与醛/酮之间双向可逆氧化还原反应的酶类，需要辅酶NAD(H)或NADP(H)作为氢传递体。目前，羰基还原酶主要分布于短链脱氢酶（Short-chainDehydrogenases，SDRs）、中链脱氢酶（Medium-chainDehydrogenases，MDRs）和醛酮还原酶（Aldo-ketoReductases，AKRs）三个超家族。尽管三者的催化功能相似，但在结构上却存在较大差异。

短链脱氢酶（SDRs）是一类非金属依赖型酶，通常单个亚基含250个