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蚊子实验动物学实验标准流程

一、实验准备

（一）实验动物选择与准备

1.选择健康、品系纯合的实验动物，常用昆明小鼠（Musmusculus）或SD大鼠（Rattusnorvegicus）。

2.动物年龄范围：4-8周龄，体重200-250g。

3.实验前适应性饲养7天，保持环境温度（25±2）℃，湿度（50±10）%。

（二）实验设备与试剂

1.设备：标准饲养笼（60cm×40cm×30cm）、BOD培养箱（温度控制精度±0.5℃）、计数器、解剖镜。

2.试剂：生理盐水、75%乙醇、无水乙醇（分析纯）、乙醚（分析纯）。

二、实验流程

（一）动物麻醉与处理

1.麻醉方法：腹腔注射乙醚（0.8-1g/kg体重），麻醉深度以翻正反射消失为准。

2.手术操作：

(1)消毒：75%乙醇消毒动物背部皮肤，范围直径5cm。

(2)剖开：沿脊柱正中切开皮肤及皮下组织，暴露椎管。

(3)椎管插管：用显微手术器械插入硅胶管（内径0.8mm），固定管口。

（二）蚊虫感染操作

1.蚊虫准备：

(1)蚊种：选择嗜人按蚊（Anophelesstephensi）或埃及伊蚊（Aedesaegypti）。

(2)感染：将蚊虫置于感染血（含1×10?/mL疟原虫子孢子悬液）中吸血30分钟。

2.动物感染：

(1)吸血：将感染蚊虫放入饲养笼内，保持12小时吸血环境。

(2)更换：吸血结束后更换新鲜空气，继续观察。

（三）感染指标监测

1.外周血检测：

(1)采血：尾静脉采血（5μL），使用厚血膜染色（如Giemsa染色）。

(2)计数：显微镜下计数每100个白细胞中的原虫数（感染率≥5%判定为成功感染）。

2.组织病理学检测：

(1)取材：感染7天后处死动物，采集脾脏、肝脏。

(2)染色：HE染色观察原虫在肝窦内的浸润情况。

三、实验数据记录与处理

（一）记录要点

1.记录每次感染蚊虫密度（1-3批/实验组）。

2.记录动物体重变化（每日测量）。

3.记录原虫血症曲线（感染后第3-14天每日采样）。

（二）数据分析方法

1.统计软件：SPSS26.0或GraphPadPrism9。

2.分析指标：

(1)感染指数（InfectionIndex）=（原虫密度×感染率）/动物数量。

(2)脾脏指数（SpleenIndex）=脾脏重量（mg）/体重（g）。

四、实验注意事项

（一）操作规范

1.严格无菌操作，避免交叉感染。

2.蚊虫吸血时间需精确控制，误差±5分钟。

（二）安全防护

1.使用防蚊手套（透气材质），实验结束后立即消毒。

2.原虫样本需高压灭菌（121℃，15分钟）。

五、结果判定

（一）阳性标准

1.外周血厚膜镜检发现原虫，感染率≥10%。

2.脾脏切片观察到疟原虫（肝细胞内或肝窦）。

（二）阴性标准

1.连续3次采样未发现原虫。

2.脾脏病理未见原虫浸润。

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一、实验准备

（一）实验动物选择与准备

1.选择健康、品系纯合的实验动物，常用昆明小鼠（Musmusculus）或SD大鼠（Rattusnorvegicus）。

(1)健康标准：动物活泼，反应灵敏，无异常行为（如震颤、抽搐），毛发光泽，无皮肤病、呼吸道症状或体重异常下降。

(2)品系纯合性：通过遗传学验证或由认证机构提供证明，确保遗传背景一致，减少实验变异。

(3)年龄与体重：4-8周龄为宜，此时动物免疫系统发育成熟，对外界刺激有较好反应，同时处于性成熟前期，避免生殖因素干扰实验结果。体重控制在200-250g，保证足够营养储备以应对感染和实验操作。

2.实验前适应性饲养7天：

(1)环境：置于标准饲养笼（60cm×40cm×30cm），笼内铺有吸水垫料（如木屑或专用无尘垫料），保持环境温度（25±2）℃，相对湿度（50±10）%，12小时/12小时光照周期。

(2)喂养：提供标准颗粒饲料和清洁饮用水，每日更换。观察动物适应情况，确保无应激反应。

（二）实验设备与试剂

1.设备：

(1)标准饲养笼：具备良好通风和光照，便于观察和操作。笼具材质需耐腐蚀、易清洁消毒。

(2)BOD培养箱（生化培养箱）：用于模拟蚊虫吸血环境，需配备湿度传感器，确保湿度稳定。箱内温度可精确控制在（27±1）℃，模拟适宜蚊虫活动的温度。

(3)计数器：手动或电子计数器，用于血涂片原虫计数，电子计数器需校准。

(4)解剖镜：配备不同放大倍数物镜（如10×，40×），用于观察动物内部结构和组织病理学样本。

(5)显微镜：配备油镜（100×），用于血涂片和病理切片的原虫观察。

(6)显微手术器械：显微镊子、显微剪刀、显微止血钳，确保器械锋利且无菌。

(7)尾静脉采血器：包括加热垫、尾静脉分离器、一次性