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医学基础实验操作技巧指南

引言

医学基础实验是医学研究与临床实践的基石，其操作的规范性、精准性直接关系到实验结果的可靠性与科学性，更在一定程度上影响着研究者科研思维的培养。对于初入实验室的研究者而言，掌握扎实的基础操作技巧，不仅是顺利完成实验的前提，更是保障实验安全、提升实验效率的关键。本指南旨在结合实践经验，系统梳理医学基础实验中的核心操作技巧与注意事项，为研究者提供一份兼具专业性与实用性的参考。

一、实验操作的灵魂：无菌观念与规范意识

医学实验，尤其是涉及细胞培养、微生物操作及生物样本处理时，无菌观念是重中之重。

1.环境与个人准备：进入实验室前，应更换专用实验服，佩戴口罩、帽子，必要时佩戴手套。操作前，需用合适的消毒剂（如75%乙醇）擦拭双手及操作台面。超净工作台或生物安全柜是无菌操作的核心区域，使用前需提前开启紫外灯照射足够时间，操作时确保气流正常。

2.物品的无菌处理：实验所用的试剂、耗材（如移液枪头、离心管、培养皿）需确保无菌。对于可高压灭菌的物品，应严格按照灭菌程序处理，并在有效期内使用。开启无菌试剂或耗材时，瓶盖或包装开口处应朝向无菌区域，避免手直接接触内壁或无菌部分。

3.操作过程的无菌控制：操作动作应轻柔、准确，避免在敞口容器上方大范围移动手臂或交谈。使用过的吸管、枪头等应及时丢弃于指定的锐器盒或消毒容器中，避免污染环境或造成刺伤。一旦发生液体洒落等污染情况，需立即用适当的消毒剂进行处理。

规范意识贯穿于实验的每一个环节。严格按照实验方案操作，不随意更改实验参数；准确记录实验数据与现象，不凭空捏造或篡改结果；实验结束后，及时清理实验台面，关闭仪器设备，妥善处理实验废弃物。这些看似琐碎的细节，实则是科研诚信与实验安全的基本保障。

二、核心操作技巧详解

（一）移液器的精准使用

移液器是定量转移液体最常用的工具，其操作的精准度直接影响实验结果的重复性。

1.量程选择：根据所需移取液体的体积，选择合适量程的移液器。原则上，应使移取体积处于移液器量程的30%-100%之间，以保证精度。调节量程时，应缓慢旋转旋钮，避免超过量程范围，损坏内部精密部件。

2.吸头安装：选择与移液器匹配的吸头，将移液器端垂直插入吸头，轻轻旋转使其紧密结合，避免用力过猛导致移液器杆弯曲或吸头松脱。

3.吸液与放液：吸液时，拇指按压移液器按钮至第一停点，将吸头垂直浸入液面以下适当深度（通常为1-2mm，避免过深导致吸头外壁沾液过多），然后缓慢、平稳地释放按钮，让液体自然吸入吸头。放液时，将吸头尖端靠在容器内壁，缓慢按压按钮至第一停点，稍作停顿后，继续按压至第二停点，确保液体完全排出。吸头尖端残留的少量液体通常为设计允许，无需吹出（除非使用带“吹”功能的移液器及对应吸头）。

4.注意事项：避免将移液器倒置或平放，以防液体倒流污染内部活塞；移取不同液体时，务必更换吸头，防止交叉污染；使用完毕后，应将移液器量程调至最大值，垂直悬挂于移液器架上。

（二）离心技术的规范操作

离心技术常用于分离液体中的不同组分，是生物化学、分子生物学实验中不可或缺的手段。

1.离心管的选择与平衡：根据离心需求（转速、容量、腐蚀性等）选择合适材质和规格的离心管。离心前，务必进行严格的平衡。将装有等量液体的离心管对称放置于离心rotor中。若样品数量为奇数，可用等量的水或平衡液代替。平衡时，不仅要保证重量一致，更要注意重心对称。

2.离心参数的设置：根据实验要求准确设置离心速度（rpm或g，注意两者的转换）和离心时间。启动离心机前，务必确认rotor盖已拧紧，离心机门已关好。

3.离心过程与结束后操作：离心启动初期，应观察离心机是否有异常震动或噪音，如有应立即停机检查。离心过程中，禁止随意打开离心机盖。离心结束后，待rotor完全停止转动方可打开盖子取出离心管。取出离心管时，动作应轻柔，避免剧烈晃动导致已分离的组分重新混合。

（三）显微镜操作与样品观察

显微镜是观察微观世界的窗口，正确使用显微镜能获得清晰、准确的观察结果。

1.显微镜的选择：根据观察需求（如细胞形态、染色情况、荧光标记等）选择合适的显微镜，如普通光学显微镜、相差显微镜、荧光显微镜等。

2.样品制备：确保样品制备合格，如涂片要均匀、厚薄适中；装片时避免产生气泡；切片要完整无褶皱。对于活体细胞观察，需注意保持适宜的温度和培养液环境。

3.操作步骤：

*调光：打开光源，调节光阑和反光镜（或调节光源亮度旋钮），使视野亮度适中、均匀。

*调焦：先将低倍物镜对准通光孔，升高镜筒（或降低载物台），放置样品片，用粗准焦螺旋缓慢下降镜筒（或升高载物台），直至物镜接近样品片（注意不要接触），然后左眼注视目镜，反向调节粗准焦螺旋，使镜筒缓慢上升（或载物台缓