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任务一血糖测定
一、原理
二、试剂
三、操作方法
四、计算
五、注意事项
六、正常血糖值
七、临床意义
一、原理
无蛋白血滤液中的葡萄糖,具有还原性,与碱性高铜混合加热后,将高铜还原成氧化低铜而呈红色沉淀,此沉淀物再被磷钼酸氧化成蓝色物质。与同样处理的标准葡萄糖管比色,而求得血糖含量。
二、器材与试剂
1.0.25%苯甲酸溶液。取苯甲酸2.5g,溶于煮沸蒸馏水100mL中。冷却后,应用时吸取上清液。本品为防腐剂,放在冷暗处,可较久地保存。
二、器材与试剂
2.葡萄糖贮存标准液(1mL含10mg葡萄糖)。取少量化学纯葡萄糖,置硫酸或氯化钙干燥器内过夜后,精确称取已干燥葡萄糖1g,置于100mL量瓶中,加0.25%苯甲酸溶液至刻度,混匀使之完全溶解。
3、葡萄糖应用标准液。取葡萄糖贮存标准液5mL,置500mL量瓶中,加0.25%苯甲酸溶液至刻度处混均。此液至少可保存半年。
二、器材与试剂
4.碱性铜溶液
无水碳酸钠(化学纯)40g,酒石酸(化学纯),结晶硫酸铜(化学纯)4.5g,蒸馏水加至1000。
配法:先将无水碳酸钠溶于400mL蒸馏水中;酒石酸溶于300mL蒸馏水中,硫酸铜溶于200mL蒸馏水中;均可加热助溶。待各液完全溶解,冷却后,依次倾入1000mL量瓶中,混匀,补加蒸馏水至刻度。此试剂如呈蓝色,则不能应用。
二、器材与试剂
5、磷钼酸试剂
氢氧化钠40g,钼酸(化学纯)70g,钨酸钠(化学纯)10g,浓磷酸(浓度85%,相对密度1.71)250mL,蒸馏水加至1000mL。
二、器材与试剂
5、磷钼酸试剂
配法:将氢氧化钠溶于约800mL蒸馏水中,再加人钼酸和钨酸钠。为除去钼酸内可能存的残氮,煮沸20~50min至容器内无氨气为止,冷却后,倾入1000mL量瓶中,并以少量蒸馏水冲洗原容器壁,一并倾入量瓶。加入浓磷酸,最后加蒸馏水稀释至刻度。滤过,装于棕色瓶中,避光保存备用。此液应为无色或极淡绿色溶液。如保存不当,而变为黄绿色或蓝色,表示本身已被还原,不能应用。
二、器材与试剂
6.10%钨酸钠溶液。此液应为中性,如过酸或过碱,可用N/10硫酸或N/10氢氧化钠液校正。
7.2/3mol/L硫酸溶液。取当量硫酸溶液2份加蒸馏水1份,混合即得。
二、器材与试剂
三、操作方法
1、制备无蛋白血滤液50mL。制备时常用钨酸钠法。其步骤是:取小烧杯或大试管一支,先盛蒸馏水7mL,再加入新鲜抗凝血1mL,充分混匀,使之溶血。然后,加入10%钨酸钠溶液1.0mL,混匀。最后,徐徐加入2/3mol/L硫酸溶液1mL,随加随摇,充分混匀。放置5~10min后,用优质滤纸过滤或离心沉淀,即可获得无色清亮无蛋白血滤液以备使用。
此法所得无蛋白血滤液近中性,不仅适用于葡萄糖的测定,还可用于非蛋白氮、尿素氮,肌酐等的测定。
2、取血糖测定管3支,分别标明测定管、标准管及空白管,按表2-10操作。
步骤
测定管
标准管
空白管
无蛋白血滤液
2ml
—
—
葡萄糖标准应用液
—
2ml
—
蒸馏水
—
—
2ml
碱性铜溶液
2ml
2ml
2ml
表2-10血糖测定操作步骤
三、操作方法
混合后,于沸水中煮沸8min(严守时间),取出后浸于冷水2~3min(不可摇动),分别于测定管、标准管、空白管中加入磷钼酸试剂各2、2、2mL。混合后,于室温内静置2min、再分别于3个管中加蒸馏水加至25、25、25mL。混匀,待管内二氧化碳逸出后比色。选用620nm滤光板比色,读取各管光密度。
三、操作方法
四、计算
五、注意事项
1、血糖测定管必须符合标准,否则不能应用。
2、试剂若已变质应废弃,重新鲜配制。例如,碱性硫酸铜溶液有黄色沉淀,或磷钼酸试剂变为蓝色均表示已变质,应重新配制。
3、血液标本必须新鲜,不能放置过久,否则血糖易分解,致使血糖偏低。如不能及时测定,则应先制成无蛋白血滤液后,放冰箱内保存。
六、常见动物正常血糖值
动物种类
血糖正常值
动物种类
血糖正常值
范围
平均值
范围
平均值
黄牛
77.0-115.0
97.0
犬
80.0-165.0
110.0
水牛
51.9-85.6
79.4
猫
60.0-145.0
114.0
奶牛
45.0-130.0
89.0
鸡
152.0-182.0
167.0
牦牛
37.8-57.13
47.48
兔
128.0-135.0
—
绵羊
55.0-131.0
80.0
马
65.0-135.0
106.0
山羊
43.0-100.0
72.0
骡
56.9-110.0
83.8
猪
60.0-136.0
90.0
驴
65.0-86.5
46.5
七、临床意义
1、血糖增高
血糖增高是由于肝糖分解的加速或组织对葡萄糖利用的减
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