血糖测定实验操作指南.pptxVIP

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任务一血糖测定

一、原理

二、试剂

三、操作方法

四、计算

五、注意事项

六、正常血糖值

七、临床意义

一、原理

无蛋白血滤液中的葡萄糖,具有还原性,与碱性高铜混合加热后,将高铜还原成氧化低铜而呈红色沉淀,此沉淀物再被磷钼酸氧化成蓝色物质。与同样处理的标准葡萄糖管比色,而求得血糖含量。

二、器材与试剂

1.0.25%苯甲酸溶液。取苯甲酸2.5g,溶于煮沸蒸馏水100mL中。冷却后,应用时吸取上清液。本品为防腐剂,放在冷暗处,可较久地保存。

二、器材与试剂

2.葡萄糖贮存标准液(1mL含10mg葡萄糖)。取少量化学纯葡萄糖,置硫酸或氯化钙干燥器内过夜后,精确称取已干燥葡萄糖1g,置于100mL量瓶中,加0.25%苯甲酸溶液至刻度,混匀使之完全溶解。

3、葡萄糖应用标准液。取葡萄糖贮存标准液5mL,置500mL量瓶中,加0.25%苯甲酸溶液至刻度处混均。此液至少可保存半年。

二、器材与试剂

4.碱性铜溶液

无水碳酸钠(化学纯)40g,酒石酸(化学纯),结晶硫酸铜(化学纯)4.5g,蒸馏水加至1000。

配法:先将无水碳酸钠溶于400mL蒸馏水中;酒石酸溶于300mL蒸馏水中,硫酸铜溶于200mL蒸馏水中;均可加热助溶。待各液完全溶解,冷却后,依次倾入1000mL量瓶中,混匀,补加蒸馏水至刻度。此试剂如呈蓝色,则不能应用。

二、器材与试剂

5、磷钼酸试剂

氢氧化钠40g,钼酸(化学纯)70g,钨酸钠(化学纯)10g,浓磷酸(浓度85%,相对密度1.71)250mL,蒸馏水加至1000mL。

二、器材与试剂

5、磷钼酸试剂

配法:将氢氧化钠溶于约800mL蒸馏水中,再加人钼酸和钨酸钠。为除去钼酸内可能存的残氮,煮沸20~50min至容器内无氨气为止,冷却后,倾入1000mL量瓶中,并以少量蒸馏水冲洗原容器壁,一并倾入量瓶。加入浓磷酸,最后加蒸馏水稀释至刻度。滤过,装于棕色瓶中,避光保存备用。此液应为无色或极淡绿色溶液。如保存不当,而变为黄绿色或蓝色,表示本身已被还原,不能应用。

二、器材与试剂

6.10%钨酸钠溶液。此液应为中性,如过酸或过碱,可用N/10硫酸或N/10氢氧化钠液校正。

7.2/3mol/L硫酸溶液。取当量硫酸溶液2份加蒸馏水1份,混合即得。

二、器材与试剂

三、操作方法

1、制备无蛋白血滤液50mL。制备时常用钨酸钠法。其步骤是:取小烧杯或大试管一支,先盛蒸馏水7mL,再加入新鲜抗凝血1mL,充分混匀,使之溶血。然后,加入10%钨酸钠溶液1.0mL,混匀。最后,徐徐加入2/3mol/L硫酸溶液1mL,随加随摇,充分混匀。放置5~10min后,用优质滤纸过滤或离心沉淀,即可获得无色清亮无蛋白血滤液以备使用。

此法所得无蛋白血滤液近中性,不仅适用于葡萄糖的测定,还可用于非蛋白氮、尿素氮,肌酐等的测定。

2、取血糖测定管3支,分别标明测定管、标准管及空白管,按表2-10操作。

步骤

测定管

标准管

空白管

无蛋白血滤液

2ml

葡萄糖标准应用液

2ml

蒸馏水

2ml

碱性铜溶液

2ml

2ml

2ml

表2-10血糖测定操作步骤

三、操作方法

混合后,于沸水中煮沸8min(严守时间),取出后浸于冷水2~3min(不可摇动),分别于测定管、标准管、空白管中加入磷钼酸试剂各2、2、2mL。混合后,于室温内静置2min、再分别于3个管中加蒸馏水加至25、25、25mL。混匀,待管内二氧化碳逸出后比色。选用620nm滤光板比色,读取各管光密度。

三、操作方法

四、计算

五、注意事项

1、血糖测定管必须符合标准,否则不能应用。

2、试剂若已变质应废弃,重新鲜配制。例如,碱性硫酸铜溶液有黄色沉淀,或磷钼酸试剂变为蓝色均表示已变质,应重新配制。

3、血液标本必须新鲜,不能放置过久,否则血糖易分解,致使血糖偏低。如不能及时测定,则应先制成无蛋白血滤液后,放冰箱内保存。

六、常见动物正常血糖值

动物种类

血糖正常值

动物种类

血糖正常值

范围

平均值

范围

平均值

黄牛

77.0-115.0

97.0

80.0-165.0

110.0

水牛

51.9-85.6

79.4

60.0-145.0

114.0

奶牛

45.0-130.0

89.0

152.0-182.0

167.0

牦牛

37.8-57.13

47.48

128.0-135.0

绵羊

55.0-131.0

80.0

65.0-135.0

106.0

山羊

43.0-100.0

72.0

56.9-110.0

83.8

60.0-136.0

90.0

65.0-86.5

46.5

七、临床意义

1、血糖增高

血糖增高是由于肝糖分解的加速或组织对葡萄糖利用的减

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