林木种苗培养基配制技术.pptxVIP

林木种苗生产技术主讲教师：陈佳·培养基的配制

配置培养基流程图确定配方准备用具和母液称量蔗糖和琼脂量取母液加热溶解定容调节PH分装封口灭菌

一、确定配方，计算用量培养基配方：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/LPH:5.8配制1L培养基成分浓度或扩大倍数量取容积(ml)计算公式MS大量201×1000÷20=50量取容积（ml）=配制容积（L）×1000÷扩大倍数微量1001×1000÷100=10铁盐1001×1000÷100=10有机1001×1000÷100=106-BA1mg/mL2.0×1÷1=2量取容积（ml）=配制浓度（mg/L）×配制容积（L）÷母液浓度蔗糖30×1=30g琼脂4×1=4gPH读取数据5.8加1mol/L的HCl读取数据5.8加1mol/L的NaOH

二、准备用具和母液电子天平电磁炉量筒胶头滴管移液管PH计分装烧杯组培瓶

三、称量所需药品1、调平感量0.01g电子天平

三、称量所需药品2、称量称取30g称取4g

四、量取母液母液类型量取容积(ml)大量50微量10铁盐10有机106-BA2注意事项：1、将母液从冰箱拿出时，要观察是否有沉淀和结晶，若有则不能使用。2、量取前，需先清洗玻璃仪器，然后用纯水和母液润洗。

四、量取母液3、用量筒量取时，先加至快到用量，而后用滴管慢慢加到配置量，读数时眼睛与水平线平齐，以凹液面的读数为准；4、量取完一种母液后，玻璃仪器需要重新清洗、润洗，若量取母液超过量取量时，用胶头滴管吸出，放入废液缸中，切记不能放回母液瓶。

五、加热溶解注意事项：1、加入蒸馏水，能溶解蔗糖和琼脂即可，不可超过配置量，防止溢出。2、用玻璃棒边加热边搅拌，搅拌时，玻璃棒不能碰到烧杯壁，以免发出碰撞声。3、直至烧杯中的琼脂条和蔗糖完全溶解，注意调节温度，不要将溶液煮沸。

六、溶液定容注意事项：1、加纯水定容时，可利用玻璃棒引流，或用洗瓶加水，边倒入边搅拌。2、快到所需用量时，可用胶头滴管定容，直至烧杯中的刻度凹液面为配制所需用量。

七、调节PH1、用1mol/L的HCl或NaOH对培养基的pH值进行调整，调至pH为5.4～6.0为宜。2、用玻璃棒一端沾取少量待测液后滴在试纸上，观察颜色变化。若PH值偏高，加HCl溶液后再测；若PH值偏低，加NaOH溶液后再测。3、经高压灭菌后pH值又会下降0.1～0.3左右。

八、培养基分装和封口

九、培养基的灭菌1、根据培养基的用量选择灭菌锅，检查灭菌锅，排气孔一定要关闭。2、灭菌时间、温度、压强设定。20-30min，121°，0.1～0.15MPa。3、需要灭菌的器皿、培养基等放入灭菌锅，加上盖拧紧后即可开始加热（不要装得太满，以不超过锅容量的3/4为宜。）4、取出培养基，放置在干净处让其凝固，配好的培养基放置时间不宜太长，以免干燥变质。一般至多保存2周左右。

主讲教师：陈佳THANKYOU谢谢观看·培养基的配制