酶制剂测定方法与活力分析.pptxVIP

酶制剂的测定;一、概述;酶在一定条件下催化某一特定反应的能力即酶活力，是表达酶制剂产品的一个特征性专属指标。产品酶活力在标示值的85%~115%。;α-淀粉酶活力测定

α-淀粉酶：指能水解淀粉分子链中的α-1,4葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉黏度迅速下降的酶。;中温α-淀粉酶活力单位：1g固体酶粉(或1mL液体酶)，于60℃、pH=6.0条件下1h液化1g可溶性淀粉，即1个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。

耐高温α-淀粉酶活力单位：1g固体酶粉(或1mL液体酶)，于70℃、pH=6.0条件下，1min液化1mg可溶性淀粉，即1个酶活力单位，以U/g(U/mL)表示。;（1）原理：α-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的α-1,4葡萄糖苷键随机切成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。;（2）仪器;原碘液：标取11.0g碘和22.0g碘化钾，用少量水便碘完全溶解，定容至500mL,储存于棕色瓶中。

稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化钾用水溶解并定容至500mL，储存于棕色瓶中。

可溶性淀粉溶液(20g/L):称取2.000g(精确至0.001g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加至70mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒入其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100mL。溶液现配现用。

注:可溶性淀粉应采用酶制剂分析专用淀粉。

;磷酸缓冲液(pH=6.0)：称取45.23g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)和8.07g柠檬酸(C6H8O7·H2O)，用水溶解并定容至1000mL。用pH计校正后使用。

盐酸溶液(0.1mol/L)。;;待测酶液的制备;1、吸取20.0ml可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液5.00mL，摇匀后

2、(60±0.2)℃[耐高温α-淀粉酶制剂(70±0.2)℃]恒温水浴预热8min

3、加入1.00mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5min。

4、立即用自动移液器吸取1.00mL反应液

5、加到盛有0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液的试管中，摇匀，

6、并以0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液为空白，于660nm波长处，用10mm比色皿迅速测定其吸光度(A)

7、根据吸光度查《食品安全国家标准食品添加剂食??工业用酶制剂》附录B，得测试酶液的浓度;计算