细菌药敏试验操作指南.pptxVIP

细菌的药物敏感性实验主讲人：张淼丹ANIMALMICROBIOLOGYANDIMMUNETECHNOLOGY动物微生物与免疫技术

各种病原菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性也有差异，测定细菌对不同抗菌药物的敏感性，可筛选最有效的药物，或测定某种药物的抑菌(或杀菌)浓度，为临床用药控制细菌性疾病或为新的抗菌药物的筛选提供依据。药敏试验的方法很多，普遍使用的是圆纸片扩散法。

01目的要求掌握圆纸片扩散法测定细菌对抗生素等药物的敏感性试验的操作方法和结果判定，明确药敏试验在实际生产中的应用。

02仪器及材料接种环或无菌棉拭子、酒精灯、试管架、眼科镊子、温箱、普通营养琼脂平板、抗菌药物纸片、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的肉汤培养物等。干燥抗菌纸片的制备：取直径6mm的无菌滤纸片，浸于一定浓度的抗菌药液中，一般每毫升抗菌药液中，装滤纸片100片，浸泡1~2h后，37℃干燥或真空干燥，密封冷藏备用，药剂可维持1~2月有效。

03方法与步骤（1）无菌操作，取细养物，在普通营养琼脂平板上密集均匀划线（可重复来回划线）。（2）待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取各种抗菌药物圆纸片(一般在试纸片上标记有药物名称或代号)，分别紧贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，一次放好，不得移动，每板4~6个，各纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

03方法与步骤（3）平皿倒置，35℃士2℃温箱中培养16~18h，观察结果。（4）结果观察。在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。

03方法与步骤（5）结果判断，根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，作为判定各种细菌对各种抗生素等药物敏感度高低的标准。用毫米尺测量抑菌圈直径，参照表3-6的标准判读结果。

04注意事项（1）严格执行无菌操作规程，如药物的稀释液选择、药敏纸片的保管和使用方法、培养基的制作过程等。（2）磺胺类药物用无胨琼脂培养基，因蛋白胨会使磺胺失去作用。

ANIMALMICROBIOLOGYANDIMMUNETECHNOLOGY感谢你的观看与聆听！主讲人：张淼丹