第一章 实验室设备和技术.pptVIP

首次接种降低污染率的对策首次接种：小容器，多数量，尽量分散，互相隔离，效果最好。录相:菊花的组织培养(上)第30页，共30页，星期日，2025年，2月5日准备室,宽敞明亮,通风效果好.无菌室,封性好,干燥清洁,保持无菌,应防空气对流培养室,控温,控光,空气干燥清洁高温对细菌有明显的致死作用，主要机理是凝固菌体蛋白质，干烤箱为常用的干热灭菌器，其杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性完成的。干烤箱是中间夹着石棉的双层金属制成的方形或长方形箱，箱底装有热源，箱内有数层金属架，并附有温度计和自动温度调节器等装置。把待灭菌的物件均匀地放入恒温干燥箱，加热至160℃～170℃维持2小时即可达灭菌目的。

高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的耐高温和耐高压的双层金属圆筒，两层之间盛水。①外锅：供装水产生蒸汽之用。坚厚，其上方或前方有金属厚盖，盖有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢。加热后，灭菌器内蒸汽压力升高，温度也随之升高，压力越大，温度越高。外锅壁上还装有排气阀、温度计、压力表及安全阀。排气阀用于排出空气；压力表：以表示锅内压力及温度（公制压力单位为公斤/cm2、英制压力单位磅/英寸2、温度单位℃）；安全阀又称保险阀，利用可调弹簧控制活塞，超过定额压力即自行放汽减压，以保证在灭菌工作中的安全。

（在高压下，水的沸点会提高。常压下为100°，到压力升到100kpa时，水的沸点会达到121°。所以锅内温度是121了。在121℃的蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及它们高度耐热的芽孢，这些芽孢在100℃的沸水中能生存好几个小时，特别要指出，只有完全排除锅内的空气，使锅内全部是蒸汽的情况下，1.1kg/cm2的压力才对应121℃，否则灭菌便不能彻底。灭菌的功效主要是靠温度，而不是压力。

）②内锅：为放置灭菌物的空间。超净工作台由三相电机作鼓风动力,将空气通过工作台正面金属网罩内由特制的微孔泡沫塑料片层叠合而组成的”超级滤清器”后吹送出来,形成连续不断无尘无菌的超净空气层流,它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等，在进风囗（下方或背面）金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布，用以阻拦大颗粒的尘埃（应常检查、拆洗、泡沫老化要及时更换），超净工作台的空气流速为24-30m/min,这已足够防止附近空气可能干扰而引起的污染，同时也不会妨碍采用酒精洒的操作。植物组织培养最重要的，也是最基本的要求，就是各项操作都应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养过程中最经常、最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其它常用器皿。在清洗器皿处应有较大的水池，水池应用水泥制作，白瓷砖砌内外表面，池底另放一张橡胶垫，以减少器皿破损。自来水龙头宜采用三孔鹅颈式的，用水方便，并在需要时可加装抽滤器。下水道应畅通，以免妨碍工作。除水池外，还需辅助以若干盆与桶。

????洗瓶时先将瓶子在清水中泡一会儿，然后在水龙头下涮去瓶内污物，沥干水，泡入浓洗衣粉水中，再用瓶刷沿瓶壁上下刷动和呈圆周旋转两个方向刷洗。瓶外也要刷到，不要留下未刷到之处。刷后放到水龙头下用流水冲刷4次，以彻底冲去洗衣粉残留物。洗好的瓶子应透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂水珠，即表示无污迹存在。通常无须乎再用蒸馏水涮一遍，直接放入洁净的大果菜篮中，再置搁架上沥晾水汽，这可能是最省事、最节约又少占空间的办法。也可制作晾洗架，瓶子倒放在孔格中或挂在小木棍上，这样洗后要摆一遍瓶子，用时再收一次瓶子。急等使用的瓶子可以用烘箱烘干。烘时缓慢升温，温度也无须太高。我们所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其它微生物，这些东西很小，肉眼是根本看不见的，在条件适宜时它们大量孳生，这时能看到它们的集合体或形成的菌落，飘散的孢子等等。菌的特点是无孔不入，无处不有，在自然条件下忍耐力强，生活条件要求简单，繁殖能力极强，不采用适当的方法很难除灭它。但是它们也有自身的弱点，我们就采用适当的办法消灭它们，这些方法我们就叫做灭菌或消毒。

向甲醛内加入高锰酸钾，促进甲醛的快速挥发。无菌室应定期用70%酒精或0.5%苯酚喷雾降尘和消毒，用2%新洁尔灭抹拭台面和用具(70%酒精也可)，用福尔马林(40%甲醛)加少量高锰酸钾定期密闭熏蒸，配合紫外线灭菌灯(每次开启15分钟以上)等等消毒灭菌手段，以使无菌室经常保持高度的无菌状态。接种箱内部也应装有紫外线灯（注意：紫外线不能穿透玻璃，它的灯管是石英玻璃，而不是硅酸盐玻璃制成的），使用前开灯15分钟以上照射灭菌，但凡是照射不到之处仍是有菌的。在紫外线灯开启时间较长时，可激发空气中的氧分子缔合成臭氧分子，这种气体成分有很强的杀菌作用，可以对紫外线没有直接照到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康，在进入操作之前应先关掉紫外线灯，关后十多分钟即可入内。（75%酒精或3%来苏儿作用原理：使