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项目四：原种的生产（液体菌种生产）任务2：液体菌种生产工艺——摇瓶的制作工艺
3一、准备材料试管母种、超净工作台、接种用具、电池炉（或其他铝锅）、酒精灯、酒精棉球、1000ml三角瓶、牛皮纸或报纸、普通棉花、皮套、刀、菜板、下口杯、土豆、麦麸、KH2PO4、MgSO4、酵母膏、维生素B1、葡萄糖、红糖、玉米粉、黄豆粉、蛋白胨。下口杯超净工作台
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5二、摇瓶培养基配方摇瓶培养基配方1：土豆200g，麦麸50g，磷酸二氢钾2g％，硫酸镁1g，蛋白胨2g，红糖15g，葡萄糖10g，维生素B110mg，水补充至1000ml。摇瓶培养基配方2：土豆200g、糖20g、酵母膏3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、维生素B110mg，水补充至1000ml。
6免煮配方：糖20g玉米粉5g——起到增稠的作用黄豆粉（豆饼粉）10g蛋白胨2g酵母膏2g磷酸二氢钾2gMgSO41g配1000ml水
7三、摇瓶菌种制作过程1、称量将配方中各药品准确称量备用。
82、煮制将马铃薯洗净，削去皮与芽眼，切成薄片或小块，加水1000mL，在锅内煮沸后保持20min左右。马铃薯煮熟，不要太烂，然后将煮熟后的马铃薯用4～8层纱布过滤，取其过滤液。
93、分装将培养基分装在容积1000ml的三角烧瓶中，分装三角瓶时避免培养液粘到瓶壁口，用下口杯进行分装，每瓶装料1/2—3/5为宜，每瓶装500-600ml。
104、制作三角瓶子棉塞用纱布包住普通棉花，系好棉塞塞进分装好的三角瓶中盖好，棉塞大小，松紧度要适中，一般塞入3-4cm。用牛皮纸或报纸把塞好棉塞的三角瓶包扎好。
115、灭菌高压蒸汽灭菌锅，在温度121--126℃，压力0.11-0.15MPa的条件下，灭菌保持30min。灭菌后摇瓶培养基高压蒸汽灭菌锅
126、注意事项（1）、马铃薯一定要去皮并挖去芽眼。因为芽眼有毒，对菌丝有毒害作用，不利于菌丝生长发育。（2）、葡萄糖等物质一定要过滤后加入。（3）、分装时要用下口杯或漏斗，以免培养基占到瓶壁上。（4）、棉塞要用普通棉花，不能用脱脂棉。因脱脂棉易吸水湿润，影响通气，而且易污染。棉塞松紧要适当，不宜过松或过紧。
13四、接种与培养1、无菌检验在无菌操作的条件下（超净工作台上），倒入培养皿中，冷却后，放入恒温培养箱中37℃培养24-36小时。检验灭菌状态。
142、要求接种要在无菌操作条件下进行，保正母种的纯正和优良。接种室和接种箱内要提前2天用灭菌药物熏蒸。接种前将接种用品和培养基放入接种室，打开紫外线灯灭菌20分钟。接种人员进入缓冲间停留1分钟，被紫外灯照射灭菌后再进入接种室，用75%的酒精棉球擦手和工具消毒灭菌。超净工作台紫外灯照射药物熏蒸消毒剂
153、操作技术母种的选择要求：保正母种的纯正和优良。挑选无任何可疑，没染有杂菌母种，选择粗壮洁白品质好的母种，菌丝刚长满试管。（如果试管菌种是从冰箱中取出需提前24小时活化一下）。菌丝粗壮，洁白，品质好的母种
16步骤四步骤三步骤一步骤二
17步骤五步骤六步骤七
184、液体菌种的培养温度控制在23—24℃，避光
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