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毛细管电泳讲解

演讲人：

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目录

02

基本原理

01

概述与背景

03

仪器结构

04

操作步骤

05

应用实例

06

总结与展望

01

概述与背景

基本概念定义

毛细管电泳（CE）

迁移时间与峰面积

电渗流（EOF）

一种高效分离分析技术，利用带电粒子在电场作用下于毛细管中的迁移速率差异实现分离，具有高分辨率、快速分析及微量样品需求的特点。其分离机制包括电泳迁移和电渗流双重作用。

毛细管内壁表面电荷在电场中诱导形成的液体流动，是CE的核心驱动力之一。通过调节缓冲液pH或毛细管涂层可控制EOF大小，进而优化分离效率。

迁移时间反映溶质在电场中的运动速度，用于定性分析；峰面积与溶质浓度成正比，是定量分析的基础参数。

技术发展历程

早期探索（1930s-1980s）

从Tiselius的自由溶液电泳到Jorgenson的现代CE雏形，突破性工作包括75μm毛细管的使用和紫外检测器的引入，奠定高分离效率基础。

技术成熟（1990s）

商品化仪器出现，CE被广泛应用于药物分析、DNA测序等领域。1996年首台阵列毛细管电泳仪问世，推动高通量分析发展。

近年进展（21世纪）

与质谱联用（CE-MS）技术成熟，实现复杂样品的高灵敏度检测；微流控芯片电泳兴起，满足POCT（床旁检测）需求。

主要应用领域简述

生物大分子分析

包括DNA片段大小测定（如Sanger测序）、蛋白质纯度检测及单克隆抗体电荷异质性分析，分辨率优于传统HPLC。

药物研发与质量控制

用于手性药物分离、中药活性成分鉴定及药物代谢产物研究，符合ICH指导原则对杂质分析的要求。

临床诊断

血红蛋白变异体筛查、尿蛋白电泳等检测项目已纳入临床检验指南，尤其适用于微量样本（如脑脊液分析）。

环境与食品安全

检测水体中重金属形态、食品添加剂及农药残留，满足EPA和FDA法规对痕量污染物的监测需求。

02

基本原理

电泳理论基础

电荷迁移现象

带电粒子在电场作用下发生定向移动，迁移速率与电场强度、粒子净电荷量成正比，与介质黏度及粒子半径成反比，符合Smoluchowski方程。

电渗流效应

毛细管内壁表面电荷诱导形成的双电层在电场中产生整体溶液流动，是CE中不可忽视的驱动力，可通过pH值或涂层技术调控。

区带电泳原理

不同组分因电泳迁移率差异形成离散区带，理论塔板数可达10^5-10^6，远超传统电泳技术。

毛细管分离机制

采用25-100μm内径熔融石英毛细管，通过高表面积体积比实现高效散热，确保分离过程温度梯度小于0.1℃/cm。

焦耳热控制技术

塞式进样方式

多模式分离机制

通过压力或电动进样引入纳升级样品（典型10-50nL），进样长度控制在毛细管总长的1-2%以避免区带展宽。

包括自由溶液区带电泳（CZE）、胶束电动色谱（MEKC）、等电聚焦（CIEF）等七种基本模式，可覆盖从离子到中性分子的分离需求。

关键影响因素分析

缓冲液体系优化

需平衡pH值（影响溶质电荷态）、离子强度（决定电导率）、添加剂（如SDS、环糊精等修饰选择性）三要素。

检测器灵敏度提升

紫外检测需克服短光程限制（采用气泡池或Z型池），激光诱导荧光检测可达zeptomole级灵敏度。

电场参数设计

典型场强200-500V/cm，需在分离效率（高场强）与焦耳热效应间取得平衡，使用恒压或梯度电压编程。

03

仪器结构

毛细管组件特性

材质与内径选择

毛细管通常由熔融石英制成，内径范围在25-100微米之间，这种细小的内径有助于产生高电场强度并减少焦耳热效应，同时提高分离效率。

表面修饰技术

毛细管内壁可进行动态或静态涂层处理，如聚丙烯酰胺或聚乙烯亚胺涂层，以调节电渗流（EOF）并减少样品吸附，改善分离重现性。

长度优化

毛细管长度需根据分离需求调整，短毛细管（20-40cm）适用于快速分析，长毛细管（60-100cm）则用于复杂样品的更高分辨率分离。

电极系统配置

高压电源设计

电极系统需配备0-30kV可调高压电源，确保电场强度稳定，同时具备极性切换功能以适应阴/阳离子分析需求。

缓冲液槽与电极材料

铂金或银/氯化银电极浸入缓冲液槽中，需定期更换缓冲液以避免pH漂移和离子耗尽，保证电泳过程稳定性。

接地与屏蔽措施

系统需集成接地保护电路和电磁屏蔽装置，防止高压放电干扰检测信号，提升数据信噪比。

检测装置类型

紫外-可见光检测器

通过毛细管透明窗口实现在线检测，适用于具有紫外吸收的化合物（如蛋白质、核酸），波长范围通常为190-600nm，需优化光路聚焦以提高灵敏度。

质谱联用接口（CE-MS）

通过电喷雾电离（ESI）或大气压化学电离（APCI）将毛细管流出物引入质谱，提供高特异性分子量信息，适用于代谢组学和蛋白质组学研究。

激光诱导荧光检测器（LIF）

利用激光激发荧光标记物（如FITC